流式细胞标本处理方法请教

dragonhzqsmmu

各位老师，想请教几个流式细胞标本处理的小问题：

1）比如我处理50ul的全血，用1ul的流式抗体去标记细胞，如何完全混匀细胞和抗体？我是在加抗体的时候就用1ul的移液器反复吹打数次，然后放震荡摇床上震荡20min，看说明书是加入抗体后室温标记20min，这个是直接放避光的盒子里面扔抽屉里面就行还是把标本避光后放震荡摇床上处理？or vortex十几秒后静置标记？

2）对于小体积标本我是用1.5ml的EP管处理抗体标记和裂红的，也看到有老师直接在流式管中处理，但是感觉尽管节省耗材但在流式管中处理毕竟操作不方便（我用的是BD的Calibur机器，流式管感觉有点长，吸取和吹打感觉比1.5ml的EP管要费事点），如果用流式管处理标本的话一般用水平转子大约转速多少处理多长时间才能确保细胞能全部收集下来？

didi_zhou

1. 加进去以后用Vortex旋个10-20秒钟就好了，然后避光静置就好。还有布朗运动的。

2. 1500转、5分钟试试看。不计数的话只要收集够细胞就行了，不用确保太全部。

niwanmao

1、我们采用的方法是先加抗体，再加标本，然后用手轻轻弹匀，弹的时候注意不要太剧烈，同时注意管壁上是否粘附有少量抗体，如有，可以用700转瞬时离心，然后再震荡。

2、我们都是用流式管直接处理的，不费事。转速我们一般是1500转×5分钟。