关于IFN-γ IFN-gamma检测流式抗体的选择

kobe327292007

IFN-γ有两种常用的检测方式，ELISA检测上清和流式检测胞内，权衡了一下，决定做流式测胞内。



如上，想测一下左上的NK细胞的IFN-γ的胞内表达。

现在的条件是calibur，488nm激发波长，不知道能不能做三色的流式，除了用FITC-CD3和PE-CD16/56之外，选择哪个荧光标记的IFN-γ比较好？现在的条件能否实现？还有不知道哪位做过的朋友觉得您用的哪个公司的抗体比较好？

niwanmao

如果确定是只有488nm，那是只能3色，似乎只能percp或pe-cy5.5、pe-cy7等可选。相对来说，pe-cy7更亮一些。
选抗体的话，哪个公司问题不是很大，关键是抗体的克隆，建议采用文献中已验证过的克隆，如：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... tid=2123&ctid=6  中使用的B27克隆

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-6-26 10:18

                               
登录/注册后可看大图

如果确定是只有488nm，那是只能3色，似乎只能percp或pe-cy5.5、pe-cy7等可选。相对来说，pe-cy7更亮一些。
...

哎呀多谢啊，嘿嘿，还是老师你给力啊，我今天就订购了。

renping_jsnj

kobe327292007 发表于 2013-6-26 10:36

                               
登录/注册后可看大图

哎呀多谢啊，嘿嘿，还是老师你给力啊，我今天就订购了。

不知道你做什么种属，我做过小鼠Th17/IFNg的检测。用的抗体是BD的，Cat#：557724。大鼠的现在有同事正在做尝试，好用的话再报告大家。

kobe327292007

renping_jsnj 发表于 2013-6-26 16:03

                               
登录/注册后可看大图

不知道你做什么种属，我做过小鼠Th17/IFNg的检测。用的抗体是BD的，Cat#：557724。大鼠的现在有同事正在 ...

谢谢了，我做的是人的，也同样对你的热心表示感谢啊。

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-6-26 09:26

                               
登录/注册后可看大图

如果确定是只有488nm，那是只能3色，似乎只能percp或pe-cy5.5、pe-cy7等可选。相对来说，pe-cy7更亮一些。
...

老师，我又再次询问了，管理仪器的老师当时心里想别的事情，所以随口回答了我。

这次确认是488nm和633nm激发光都有，他说calibur最多只能同时做4色。

老师，您看是不是这样子的？

niwanmao

kobe327292007 发表于 2013-6-26 16:54

                               
登录/注册后可看大图

老师，我又再次询问了，管理仪器的老师当时心里想别的事情，所以随口回答了我。

这次确认是488nm和633nm ...

是的，我也觉得奇怪，一般都是两根的。那么确定就是4色了，可以加个APC配成4色。

kobe327292007

niwanmao 发表于 2013-6-26 19:22

                               
登录/注册后可看大图

是的，我也觉得奇怪，一般都是两根的。那么确定就是4色了，可以加个APC配成4色。 ...

哈哈，太好了，等我实验都做完了，回头好好写几个总结，给论坛的新人一些建议。

ad2linlin

我还用过eFluor660，跟APC一个通道，效果也很好。不知道链接能打开吗？
http://www.ebioscience.com/human-ifn-gamma-antibody-efluor-660-4sb3.htm
附件是这个试剂的介绍，基本无需补偿调节。

ad2linlin

另：作细胞内检测时，Protein transport inhibitor我觉得Brefeldin比monensin好，效率高。