T细胞CD44和CD62L染色

zhouby701

我们的实验想分析CD8T细胞亚群，但是CD44和CD62L 一直染不好，请大家帮我们分析一下，谢谢。

小鼠CD44CD62L

niwanmao

想问几个问题：
一共70多万个细胞，你的染色体积是多少？抗体用量是多少？各个抗体的克隆号是什么？

zhouby701

niwanmao 发表于 2013-8-14 14:28

                               
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想问几个问题：
一共70多万个细胞，你的染色体积是多少？抗体用量是多少？各个抗体的克隆号是什么？ ...

100ul染色体积，细胞量为2×10e6，抗体均为BD公司产品，Percp-cy5.5 Rat anti-mouse CD44,克隆号是：IM7，抗体量2ul; APC Rat anti-mouse CD62L, 克隆号是：MEL-14，抗体量是2ul.

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-8-17 15:59

                               
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100ul染色体积，细胞量为2×10e6，抗体均为BD公司产品，Percp-cy5.5 Rat anti-mouse CD44,克隆号是：IM7 ...

从图形上看，CD3阳性群分不开，CD8虽然分开了，但S/N比不高。所以我在担心你所用的其它抗体量可能亦存在不足。从CD62L的图看，这些细胞可能是CD62L假阴性，就是说，可能你减少细胞量至1×10E6或5×10E5，染色体积减少到50ul，CD62L的荧光就会得到大大提高。

zhouby701

niwanmao 发表于 2013-8-17 21:20

                               
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从图形上看，CD3阳性群分不开，CD8虽然分开了，但S/N比不高。所以我在担心你所用的其它抗体量可能亦存在不 ...

谢谢老师的指导，您的意思是我们的抗体加的少了，染色的体系又有点大吗？我们这个要检测的组合总共有7个marker同时标记，我们想把抗体稀释一下，因为每次加2微升，不容易加准，想把抗体稀释到5ul体积/test,这样我的检测管就是100ul细胞，加35微升抗体，您觉得这样可以吗？

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-08-21 10:55:06

                               
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谢谢老师的指导，您的意思是我们的抗体加的少了，染色的体系又有点大吗？我们这个要检测的组合总共有7个m

2ul应该还好加的啊，我们平时经常加2ul的量，关键还是手法。还是不要稀释，染色体积减少到50ul试试

zhouby701

niwanmao 发表于 2013-8-21 12:28

                               
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2ul应该还好加的啊，我们平时经常加2ul的量，关键还是手法。还是不要稀释，染色体积减少到50ul试试 ...

最主要是我们每次做流式用的抗体种类比较多，有些抗体加的量都不一样，有的不到1微升/test。我看到别的同学是把抗体稀释到一定的浓度，每支抗体都是10微升/test，这样方便操作。另外，您指的50ul的染色体系里面也是1*10e6细胞数目吗?

niwanmao

zhouby701 发表于 2013-8-21 16:10

                               
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最主要是我们每次做流式用的抗体种类比较多，有些抗体加的量都不一样，有的不到1微升/test。我看到别的同 ...

抗体的稀释液有专门的配方，你如果随意用PBS稀释我担心效果没法保证。现在1ul、2ul加样都不是问题，关键还是操作的手法上。
50ul里面还是要有1×10E6细胞的

yangyangyang

我想请问一下，您是用CD44和CD62L检测什么分子呢？

行棋无悔

niwanmao 发表于 2013-8-21 16:19
抗体的稀释液有专门的配方，你如果随意用PBS稀释我担心效果没法保证。现在1ul、2ul加样都不是问题，关键 ...

老师您好！请问染色体积用50ul是不是比100ul的效果好，尤其是对胞内染色。我一直比较困惑这个问题