弱问CFSE数据分析中的圈门策略

FACS_tiger

本人用MACS的方法分选出了小鼠脾脏的CD8细胞，用2ug/mL的CD3 Coating96孔板，2ug/mL 的CD28和5U/mL IL-2刺激，正常T细胞培养基RPIM1640加10% FBS，丙酮酸钠，beta-巯基乙醇等国际惯例东西，培养72hr，用FACSverse获得数据。
在CFSE渗入检测培养的细胞增殖的实验数据的分析中，不知道究竟该怎么画门。

                               
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上图中，灰色是排除细胞之后，做出的柱状图。
想请教各位：
第一，究竟FSC和SSC都偏小的细胞要不要算到分析细胞中（抱歉没有染7AAD），这些细胞CFSE都很强，而且其表面的Marker都很完整(CD8)。
换一种问法，正常的T细胞在刺激之后，如果其形态没有变大，颗粒性没有增强，是否就算它们死了。
希望各位大牛不吝赐教。

niwanmao

先圈中你要分析的目的细胞，然后再看该类细胞的FL1，可用modfit简化你的分析步骤。