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[标本处理] 请问单核细胞右边的这群是什么细胞

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发表于 2013-9-13 11:47:41 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏1流星未解决
本帖最后由 刘星宇 于 2013-9-13 11:50 编辑

散点图如下,按我理解P1是中性粒细胞,P2是淋巴细胞,p7应该属于单核细胞,但P7右边的这群是什么细胞呢? 用的是BD FACSCalibur流式仪。

clip_image002.jpg
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发表于 2013-9-13 12:43:45 来自手机 | 显示全部楼层
是正常人的标本还是患者的标本,标了一些什么标记?可以把那些标记的散点图放出来看看。
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发表于 2013-9-13 13:54:39 | 显示全部楼层

  应该跟标记没有关系,这个只是FSC。可以问问他标本来源和处理方式。
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 楼主| 发表于 2013-9-13 15:46:06 | 显示全部楼层
本帖最后由 刘星宇 于 2013-9-13 15:50 编辑

是我自己的血标本,最近没有什么异常,当做健康对照组的。以1:1加入培养基,细胞培养箱放了4h,前面的图是没有加药物干预的。PE标记的抗体,单标,孵育抗体后1%多聚甲醛固定了将近24h,但我新鲜的一组标本也出现这种情况,与抗体似乎没有关系,空白对照、同型对照、检测管的FSC散点图都这样,多出了一群细胞。跟流式仪有关系吗?BD FACSCalibur跑的,也是十多年的仪器了,当时老师用cellquest软件分析,并没有很清楚看到多出的这群细胞,现在的图都是用diva6.1.3分析的。
另外,第四组图片:新鲜组,检测管(药物干预),中性粒左侧边的细胞是死细胞吗?
新鲜组,空白对照.PNG
新鲜组,空白对照.PNG
新鲜组,检测管.PNG
新鲜组,检测管(药物干预).PNG
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发表于 2013-9-13 15:59:41 | 显示全部楼层
didi_zhou 发表于 2013-9-13 13:54
应该跟标记没有关系,这个只是FSC。可以问问他标本来源和处理方式。

我不是说由标记引起,而是希望从标记的表达上推断这类细胞的性质
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 楼主| 发表于 2013-9-13 16:16:43 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-9-13 15:59
我不是说由标记引起,而是希望从标记的表达上推断这类细胞的性质

我们只是做了PE荧光单标记,FSC-SSC散点图跟标记有关系吗?
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 楼主| 发表于 2013-9-13 16:31:13 | 显示全部楼层
哦,这是以前加CD45用于区分淋巴、单核细胞的,看来是会影响FSC-SSC散点图的分布

中性粒右边有杂团?

中性粒右边有杂团?

细胞很乱,死细胞?

细胞很乱,死细胞?

分群较好

分群较好
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发表于 2013-9-13 17:00:00 | 显示全部楼层
刘星宇 发表于 2013-9-13 16:16
我们只是做了PE荧光单标记,FSC-SSC散点图跟标记有关系吗?

荧光应该不会影响到FSC和SSC,我觉得你刚才所说的P7右侧那堆应该是单核,而你所圈的P7不是单核,而是中性粒延伸下来
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发表于 2013-9-13 17:14:40 | 显示全部楼层
刘星宇 发表于 2013-9-13 16:31
哦,这是以前加CD45用于区分淋巴、单核细胞的,看来是会影响FSC-SSC散点图的分布 ...

建议还是标记下CD45,联合FCS和SSC看一下,那一群是什么细胞~理论上来说荧光标记是不会影响到FCS和SSC,那两个是物理标记~跟荧光没关系
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发表于 2013-11-25 23:43:17 来自手机 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-9-13 17:00:00
刘星宇 发表于 2013-9-13 16:16      
我们只是做了PE荧光单标记,FSC-SSC散点图跟标记有关系吗?  
荧光应该不会影响到FSC和SSC,我觉得你刚才所说的P7右侧那堆应该...

个人同意倪老师的观点,原图中P7位置的细胞仔细看实际是P1中性粒和P2淋巴的混合,真正单核应该是右侧这一群。
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