如何使DC细胞刺激T细胞的增殖更加明显？

pushiming77 · 发表于 2013-9-18 11:19:48

我正要做DC细胞刺激T细胞的增殖的实验。我是用BABL/c的脾脏细胞（提供DC细胞），经过丝裂霉素c后再去刺激经CFSE染色的C57BL/6的脾脏细胞（提供T细胞）。结果出来用流式分析CFSE的荧光强度，效果并不好。我做了三个梯度的刺激细胞，其中是用的96孔板，每孔30万的C57BL/6的脾脏细胞，再加上三个梯度的30万，20万，10万的BABL/c的脾脏细胞（BABL/c的脾脏细胞：C57BL/6的脾脏细胞=30w：30w； 20w：30w； 10w：30w），结果见下图。求帮助，谢谢！

niwanmao · 发表于 2013-9-18 22:41:56

FSC/SSC散点图上这类细胞比例这么少啊？

pushiming77 · 发表于 2013-9-18 23:19:29

是呀，不知道是什么的。

niwanmao · 发表于 2013-9-19 10:52:55

这个图是不是本来就这样的？你的MARKER是不是应该圈所有CFSE降低的部分？
看这篇文章：http://bloodjournal.hematologylibrary.org/content/106/6/2215.full.pdf

pushiming77 · 发表于 2013-9-19 11:53:13

不应该呀，因为还有一部分未染色的细胞呀，如果加进去了不好吧。

niwanmao · 发表于 2013-9-19 15:41:31

pushiming77 发表于 2013-9-19 11:53

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不应该呀，因为还有一部分未染色的细胞呀，如果加进去了不好吧。

关键还是你圈的目的细胞太少，你确定目的细胞是在你圈的位置？

pushiming77 · 发表于 2013-9-20 11:24:09

这就和CD3/CD28共刺激T细胞一样，如果没有受到刺激，我圈的那个地方就不细胞。对了，标题应该是NK细胞，我怎么写成DC细胞了。哎，做实验做晕了！

niwanmao · 发表于 2013-9-20 16:51:24

pushiming77 发表于 2013-9-20 11:24

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这就和CD3/CD28共刺激T细胞一样，如果没有受到刺激，我圈的那个地方就不细胞。对了，标题应该是NK细胞，我 ...

难道刺激后就NK细胞的FSC增大？其它细胞不会受影响？

pushiming77 · 发表于 2013-9-21 10:58:57

niwanmao 发表于 2013-9-20 16:51

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难道刺激后就NK细胞的FSC增大？其它细胞不会受影响？

NK细胞我用了丝裂霉素c处理过，理论上不应该增殖的（其实也在增殖，可能是药物用的不足，我用抗CD3/CD28刺激了处理过的混合细胞，和NK细胞一起处理的T细胞也增殖了）。可能还真是您所说的那样。这个实验还得继续做。还有，我发现CFSE检测增殖，要增殖很明显才能比较好的表现出来，这种特异的T细胞免疫增殖实验并不明显。……

samly0 · 发表于 2013-9-22 18:04:23

你下次实验留几个丝裂霉素处理过的BABL/c脾脏细胞作对照，镜下观察或上机检测都能了解灭活效果吧，顺便检测测这群干扰细胞信号在哪里就先把它们排除掉。不然你就CFSE/SSC圈门，再分析门内细胞的增殖看看行不行，还有你这样会不会杂细胞太多了，建议要不还是纯化培养DC或NK再刺激你的靶细胞吧，我觉得BABL/c脾脏细胞的比例还是太大了要不你按1:10,1:5试试？

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