流式分选单核细胞的效率和纯度都不高是怎么回事？

zhunlei

用的是BD FACSAria II，仪器完全调节好后，先分选T细胞或者B细胞的效率都能达到90%（分选速度10 000 events/s），纯度在99%左右。但是接着分选同样细胞浓度的PBMC中的CD14阳性细胞，分选效率就会下降到50%，纯度在80%左右。这时除非稀释样本、降低分选速度到2000 envents/s以下，分选效率才能达到90%。
每次流式分选CD14阳性细胞都不理想，有经验的老师能否只针对流式分选方面指教一下？谢谢。

niwanmao

这个问题看来只能请郭版@gcz5340  或其它分选高手来回答下。

gcz5340

你说的这个效率是机器上显示的efficiency吧，真正的得率达不到90%。你应该选的是4-way purity或purity模式，90%指因冲突事件（两个细胞离的太近为保证纯度而舍弃的）而损失10%的细胞。这可能和很多因素有关，如果分选模式、喷嘴大小和进样速度都一样的话，有可能：
1、阳性群体的百分比，百分比越低得率肯定越小；
2、目标群体的分群情况，如果CD14阳性分的不是很开，荧光强度不强也会影响分选得率。

你这个50%效率和80%的纯度确实都太低了，不知道你CD14分群情况怎么样，方便的话截图大家再分析一下。