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流式细胞术双色散点图定量分析细胞周期所有时相

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发表于 2013-9-27 12:33:33 | 显示全部楼层 |阅读模式

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一个好的细胞周期分析技术应该是可以同时检测凋亡、G0、G1、S、G2和M期,以及各种细胞表面标记。因此本文作者Christine Vignon等人研发出一种简易的流式细胞术方法,可利用双色散点图区分出各个时相,并进行定量。而方法中只需用到7-AAD和anti-Ki67、anti-phospho(Ser10)-histone H3,后两者均标记Alexa Fluor 488。分析方式如下图,在这个图中,每个时相均有其对应的位置,根据同型对照设置好位置,即可方便的定量分析各时相比例:

流式细胞术双色散点图定量分析细胞周期所有时相

流式细胞术双色散点图定量分析细胞周期所有时相


该方法在临床应用中尤其有用,可分析白血病患者骨髓初发是或经细胞周期调节药物治疗后,白血病细胞的各个细胞周期。
详细方法参见文章正文部分,有意思的是,文中1ml骨髓用20ml氯化铵裂解液裂解10分钟居然是在37度的环境下进行,这个温度我从来没试过,因为氯化铵需要冷藏,温度高容易导致降解,不知道大家有没有试过这个温度?



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组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2013-9-28 21:27:57 | 显示全部楼层
氯化铵保存是在4度,但裂红操作我们都是在室温下进行的,当然因为空调的原因达不到37度,但也差不了太多了,我记得不少老外的protocol里面提及裂红也是在室温下进行的
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 楼主| 发表于 2013-9-28 21:43:25 | 显示全部楼层
dragonhzqsmmu 发表于 2013-9-28 21:27
氯化铵保存是在4度,但裂红操作我们都是在室温下进行的,当然因为空调的原因达不到37度,但也差不了太多了 ...

裂解肯定都是在室温下进行的,但是37度确实还是第一次看到。
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发表于 2013-9-28 22:19:18 | 显示全部楼层
这个protocol看了,有点和我们普通的方法有点不同,是先染色胞内再染色表面分子
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 楼主| 发表于 2013-9-29 08:29:17 | 显示全部楼层
dragonhzqsmmu 发表于 2013-9-28 22:19
这个protocol看了,有点和我们普通的方法有点不同,是先染色胞内再染色表面分子 ...

是的,不过这两个分子(CD45、CD3)刚好丰度高,可能固定对它们影响不大。
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发表于 2017-4-8 11:37:49 | 显示全部楼层
学习了,原来一直用PI染色,看了还有更好的方法啊
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