小鼠巨噬细胞表面分子检测染色问题

leosurely

最近在检测小鼠肺组织中巨噬细胞表面分子F4/80和CD11c时发现，两个分子同时染色，只能检测到CD11c，F4/80检测不到，开始以为是抗体的原因，换了一家公司的抗体，检测结果一样。雌雄老鼠都试过，结果一样。后来改变了染色方法，先染F4/80后染CD11c，两个分子就都染上了，请问这是什么原因，群里的战友有没有遇到过这种情况，或者检测其它分子时遇到过类似情况吗？

niwanmao

查了下相关的文献，好像都没提到这个染色步骤。
如果真是如此，有可能这两者之间存在结合的空间结合上的竞争性吧

leosurely

我也是这么想的。开始以为和标记的荧光有关（因为以前做胞内染色时就发现表染分子的表达率和标记的荧光有关，但那个可能和破膜的关系更大），这次也换了荧光标记，发现结果还是一样，就开始怀疑和抗原位点竞争性结合有关，文献里一般只给个流式图，实验步骤都是一概而过，很难有什么指导，只能靠自己分析啦，希望有不同意见的战友发言共同探讨。

niwanmao

leosurely 发表于 2013-10-21 09:00

                               
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我也是这么想的。开始以为和标记的荧光有关（因为以前做胞内染色时就发现表染分子的表达率和标记的荧光有关 ...

从下面这篇文章看，作者在实验中用的F4/80和CD11c都用PE标记，看来应该是分成两管标记，或许是存在一定的影响。在平时各种流式实验中，对抗体的搭配是有一定的要求，需要不断验证。

（CCR2-Dependent Trafficking of F4/80dim Macrophages and CD11c dim/intermediate Dendritic Cells Is Crucial for T Cell Recruitment to Lungs Infected with Mycobacterium tuberculosis）：http://www.jimmunol.org/content/172/12/7647.full.pdf