FLOWJO做图，怎么调不好

20071271 · 发表于 2013-10-23 12:44:56

各位战友，帮我看看图1，我怎么都调不出来第二种图那种成团的情形。（当然，不是同样的样本，但我想要至少图2那种效果-成团-才能接受吧）。是我补偿没有调节好？电压不对（FSC-SSC跑出来挺好的）？还是有其他什么问题？恳请各位指教！
另外，我发现用FLOWJO先圈门后自动调补偿wizard。FITC-PE。调不好。
如果自己不手动调整的话，它能把FITC+划到10^1去。那时双阴性细胞都有阳性细胞了。所以我一般，自动补偿时手动调节一下，但没有一个准度，比较麻烦。各位有没有什么好方法？

20071271 · 发表于 2013-10-23 12:45:45

图1就是不成团，还不直

niwanmao · 发表于 2013-10-23 14:41:58

你做的指标跟图2 一样吗？如果不一样，别参考别人的图形。
椭圆形，可能是很多实验梦寐以求的形状，但如果你的实验结果确实如此，就接受这样的结果。

不过，话说回来，你这图1确实很象补偿过度的样子。你把FSC/SSC散点图同时也放出来，并把检测指标也写一下吧

20071271 · 发表于 2013-10-23 16:08:30

指标不一样，图1测表型，双染FITC和PE；图2测CFSE染色和死亡，用Percp和CFSE（它们两个补偿基本不用调）。但两图都是我的图。
我就想把它变成图2那种成团的图。
除了自动wIzard，我手动也调了，没有调好。不成团，不知道怎么办了

niwanmao · 发表于 2013-10-23 16:19:45

20071271 发表于 2013-10-23 16:08:30

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指标不一样，图1测表型，双染FITC和PE；图2测CFSE染色和死亡，用Percp和CFSE（它们两个补偿基本不用调）。

看fsc/ssc细胞就不是很好

月下听蝉 · 发表于 2013-10-23 17:47:37

FS/SS 细胞群有点过于狭长，这个细胞本身就大小差很多？方门里面，除了细胞群，上半部分会不会带来比较多的不相干的影响?

20071271 · 发表于 2013-10-23 20:41:33

月下听蝉发表于 2013-10-23 17:47

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FS/SS 细胞群有点过于狭长，这个细胞本身就大小差很多？方门里面，除了细胞群，上半部分会不会带来比较多的 ...

这个事原代脾脏细胞，它就是大小不均一。
门里面的其他细胞可能较多，所以我才想用双染，看数量和比例情况。
主要问题是染色后跑的图不成团，还有点倾斜

20071271 · 发表于 2013-10-23 20:44:08

niwanmao 发表于 2013-10-23 16:19

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看fsc/ssc细胞就不是很好

它可能主要是原代细胞。
能因为这个原因，使染色后的流式图不成团？而且成斜线？
我怀疑是补偿的原因，有没有调补偿更好的方法（用FLOWJO）？

niwanmao · 发表于 2013-10-23 22:03:53

20071271 发表于 2013-10-23 20:44

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它可能主要是原代细胞。
能因为这个原因，使染色后的流式图不成团？而且成斜线？
我怀疑是补偿的原因，有 ...

跟什么细胞无关，如果细胞的FSC/SSC呈这个样子，肯定不好。关键是你荧光素那个散点图总觉得你把补偿调节过度了，导致很多细胞到坐标轴外去了。

20071271 · 发表于 2013-10-24 09:31:39

niwanmao 发表于 2013-10-23 22:03

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跟什么细胞无关，如果细胞的FSC/SSC呈这个样子，肯定不好。关键是你荧光素那个散点图总觉得你把补偿调节过 ...

怎么才能把补偿调好（用FLOWJO），怎样才算好？

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