细胞凋亡

一米阳光Vino

老师同学们，有个细胞凋亡的问题咨询一下，我们用的是annexin V和PI双染色法，在混染的那管样的流式图为什么PI阳性细胞群很多呢？

niwanmao

你做的是贴壁细胞吧？

一米阳光Vino

是啊！贴壁细胞和不贴壁细胞做出来的凋亡流式图有很大区别吗？

niwanmao

一米阳光Vino 发表于 2013-11-5 09:17

                               
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是啊！贴壁细胞和不贴壁细胞做出来的凋亡流式图有很大区别吗？

是的，贴壁细胞用酶消化后，PI阳性不可避免，这是没有办法的。
我觉得你可以只单纯比较AV+PI-这堆细胞比例。

一米阳光Vino

niwanmao 发表于 2013-11-5 09:48

                               
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是的，贴壁细胞用酶消化后，PI阳性不可避免，这是没有办法的。
我觉得你可以只单纯比较AV+PI-这堆细胞比 ...

但是我们做出来的结果比例很高，是不是酶消化的时间太久啦？或者酶的浓度太大啦？

niwanmao

一米阳光Vino 发表于 2013-11-6 10:23

                               
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但是我们做出来的结果比例很高，是不是酶消化的时间太久啦？或者酶的浓度太大啦？ ...

贴壁细胞的PI单阳性细胞很难避免，确实只能通过摸索酶消化的时间、浓度上下功夫。实在不行，改用其它方法检测凋亡，例如tunel法、caspase-3活化检测等。

sunzheng_99

我觉得补偿还可以再调好些，就更好了

ypfbluesky

你的图比较奇怪的是AV-PI+的细胞很多，是不是没消化完全，靠吹打下来的导致机械性损伤很多？