如何做一个全新的抗体

yuemin5 · 发表于 2013-11-21 23:02:37

想做CTLA-4;PD-1及PDL-1在淋巴细胞的表达，但是突然感到无法下手。因为说明书以及文献上有说表达率较低，而且如果加入刺激剂的话也是短暂的增高。正常淋巴细胞中的表达率也很少有参照。
像这种不常见的抗原检测，怎么才能知道我做的结果是不是正确的呢？用同型后单标？

我想达到的状态是首先要肯定方法学是正确的，才能肯定检测的样本结果是正确的，但是如何检验方法学是否正确？
Beckman的质控血，以及临检中心的室间质评可以佐证方法学，但仅有常见抗原如T,B比例等有参考值。

niwanmao · 发表于 2013-11-21 23:02:38

难度是肯定有的，我的考虑是这样的：
1、选择正确的同型对照或阳性、阴性参照。
2、参考文献中已发表的图形。
3、选择高影响因子文章中使用的抗体和试剂。
4、保证标本和试剂的正确保存，标本的正确处理。

yuemin5 · 发表于 2013-11-21 23:03:47

"PD-1"不是笑脸D-1。呵呵系统自动笑的

月下听蝉 · 发表于 2013-11-23 23:07:38

这三个是近来热门靶标啊。自己做三个慢病毒稳转细胞系来评价买的抗体。如果抗体不行，自己筛几个好用的，再标荧光。

yuemin5 · 发表于 2013-11-24 10:11:45

我也觉得可能要做个阳参
但是慢病毒太麻烦了吧，真核表达载体可以不？

倪老师怎么看这个问题？有的标记倒是可以用刺激剂刺激提高阳性率

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