求助解析这张图，需要几色组合做出来

小呆

这张图要用几色做出来？
我认为的是5色，分别标记CD8，CD28，CD95，Ki67，CCR7 ，先从淋巴细胞亚群圈出CD8阳性，然后从CD8阳性圈出来CD28和CD95 ，然后再分别圈出Ki67和CCR95，不知道这样理解对不对？还有没有其他方法？

有一个疑问是：CD8可以直接从淋巴细胞亚群圈出来吗？还是要先从淋巴细胞亚群圈出来CD3阳性，再从CD3阳性圈出来CD8阳性，再按上面说的那样圈出来其他细胞因子？


求大神解惑！！！！

我的仪器只能做四色，激光器以及颜色通道有：488nm激光器下的green (525/30nm), yellow (583/26nm), red (680/30nm)， 以及640nm激光器下的red(661/19nm)的通道。如何更好的选择荧光素标记组合！！！

niwanmao

首先四色肯定是做不了的。
至于设门，应该是先用CD3设，然后再圈CD8，接下来再用CD45RA和CD45RO圈TCM和TEM，最后再进行图中CD28，CD95，Ki67，CCR7 样的序贯分析。所以至少是8色。我相信文章中应该会讲到荧光标记，可以看看文章的方法学部分。

小呆

niwanmao 发表于 2013-11-28 15:46

                               
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首先四色肯定是做不了的。
至于设门，应该是先用CD3设，然后再圈CD8，接下来再用CD45RA和CD45RO圈TCM和TEM ...

应该没有这么麻烦吧，CD8应该能直接从淋巴细胞亚群分出来吧，然后CD28和95从CD8阳性中圈出来，依次圈出！

文章上也没具体说明，你看看图片，我截图了！
感谢你的回复！！！

小呆

好像没有提到CD45

niwanmao

小呆 发表于 2013-11-29 08:19

                               
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应该没有这么麻烦吧，CD8应该能直接从淋巴细胞亚群分出来吧，然后CD28和95从CD8阳性中圈出来，依次圈出！ ...

NK也是会弱表达CD8的，所以你要区分CD8＋T，那么CD3是不可缺少的。

从你附上来的这部分内容看，还不只8色，可能是10色甚至更多。

小呆

niwanmao 发表于 2013-11-29 09:45

                               
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NK也是会弱表达CD8的，所以你要区分CD8＋T，那么CD3是不可缺少的。

从你附上来的这部分内容看，还不只8 ...

这样看似根本就无法操作了，如果10色的话，我的仪器最多就能做4色的！

facetodog

就图说至少6色，3、8——》95、28——》ki67、ccr7

lipc

七色可以，最好再加上CD4，数据分析时需要排除CD4 CD8双阳性细胞

sally_no10

从图来说,应该是3,8-95,28,-Ki67,CCR7,如果我做,会加CD4,也许会加CD45RA/RO.你的机器是Calibur吧?就四色,肯定是做不了的.
文章里分选了没?如果你分选了.也许能缩减到4色跑出来.