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【反思】当出现流式结果与临床诊断不符时,切记重做

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发表于 2013-11-28 19:16:40 | 显示全部楼层 |阅读模式

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2天前,做到一例分化极差的急性白血病,CD19、CD33、CD13均弱表达,CD10部分表达,CD7、CD117等标记阴性,第二轮做B系的表面标记均阴性,做髓系的标记,仅CD35、CD65出现约10%不到的阳性细胞,胞内标记MPO、cyCD79a、cyCD3、cyCD22均阴性,同时发现CD25阳性。这下让我为难了,判断为哪个系列呢?

思前想后,觉得如果是B系应该需要有cyCD79a表达,根据WHO标准,CD19弱表达(dim)的话,那么cyCD79a、cyCD22、CD10至少有两个强表达,这里只有CD10部分表达。而在AML中,MPO阴性的情况也还是不少见的。于是还是打成“原始细胞群(伴B系标记的AML?),建议必要时复查”。

但后来,融合基因出来了,FLT3-ITD、AML1/ETO等均阴性,bcr/abl居然阳性,大家知道,bcr/abl除了在CML中出现外,最常见到的急性白血病就是B-ALL了。这事情如何破呢?

于是,与临床医生沟通后,建议重新抽取标本送检,这次除了表面标记外,我亲自操刀做了胞内MPO、cyCD79a(因为T系可以排除,故cyCD3不做),因为我总觉得三个胞内标记全阴性总是怪怪的。重新配制破膜剂,使用Biolegend foxP3的破膜剂时,固定步骤延长8分钟,破膜剂洗涤一次后,最后一步与抗体孵育时间也延长8分钟。最后上机,表面抗原与上次相同,但这次cyCD79a出来了,非常明显的阳性,MPO依旧阴性。根据CD19、CD10、cyCD79a,这次终于可以很确定地下伴髓系抗原表达的B-ALL了。回顾同事之前做的,用的破膜剂是以前配制的,而且标本隔了周末两天,可能就导致cyCD79a没做出来。

由此,我深深觉得当结果有疑问或者与临床其它检查存在冲突时,仔细反省,多与临床沟通,必要时重做,既是对患者负责,也是提高自己处理、检测、判断结果水平的一个良好方式。
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发表于 2013-11-28 19:48:28 | 显示全部楼层
赞一个。。。。。。。。。。。。。。。
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发表于 2013-11-28 20:04:26 | 显示全部楼层
我们的cCD79a也经常做不出来呢,经常都是用TDT和cCD22定系别,看来破膜等条件也需要找找原因了,话说,请教倪老师您用的CD79a是哪个公司的哪个货号的抗体?
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 楼主| 发表于 2013-11-28 20:48:00 | 显示全部楼层

我们用的是Beckman的CD79a PE,目录号可能是IM2221,准确的我明天去科室查查。
破膜剂及其处理步骤都挺关键。
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发表于 2013-11-28 21:02:35 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-11-28 20:48
我们用的是Beckman的CD79a PE,目录号可能是IM2221,准确的我明天去科室查查。
破膜剂及其处理步骤都挺关 ...

我们用的是BD的CD79a-PE,破膜剂用的也是BD的,破膜剂2,但经常是做不出来。。。您那边平时都用什么破膜剂呢,看您这次用的是BIOLEGEND的。还有,我们做TDT时经常粒系上也会带上去,用过BD的和invitrogen的TDT-FITC,都是会把粒系也带上去,不知您那边有没更好的建议?
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 楼主| 发表于 2013-11-28 21:31:07 | 显示全部楼层
evadj86 发表于 2013-11-28 21:02
我们用的是BD的CD79a-PE,破膜剂用的也是BD的,破膜剂2,但经常是做不出来。。。您那边平时都用什么破膜 ...

我们用Biolegend的foxP3 破膜剂(破核的)来做胞内标记,总体还可以,但偶尔也有做不出来,我估计是跟同事处理步骤中破膜那一步的洗涤和孵育有关。
BD的Perm2用过一段时间,感觉不稳定,所以就放弃了,改成现在这个。
以前的Caltag的Fix&Perm破膜剂还可以,但后来被Invitrogen(Invitrogen后来改名为Life)收购后,不知道质量有没有变。

但前段时间贝克曼拿了点Perfix nc的破膜剂(见楼楼版主发的http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2548-1-1.html),我试用的时候感觉挺好,一是细胞分群清楚,与表面染色差不多,二是胞内标记和核内标记都能做,而且中间不需要离心,很方便。结果也很稳定。所以我们后续准备等招标进来用它了。
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发表于 2013-11-28 21:55:36 | 显示全部楼层
胞内的CD79a,不好出,尤其是不典型的病人,我们用的是BD的试剂,如果换位思考,我觉得我当时可能加做CCD22 PE,不知道倪老师在初筛的时候加胞外22了没,阴阳性,如何表达。。。
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发表于 2013-11-28 21:56:05 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2013-11-28 21:31
我们用Biolegend的foxP3 破膜剂(破核的)来做胞内标记,总体还可以,但偶尔也有做不出来,我估计是跟同 ...

用BD的机器跑也没关系吗?因为之前用溶血素时发现用BC的溶血素之后在calibur上跑出来图形分群不好。还有,TDT您用哪个厂家的啊?
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 楼主| 发表于 2013-11-28 22:25:39 | 显示全部楼层
坚强顶住 发表于 2013-11-28 21:55
胞内的CD79a,不好出,尤其是不典型的病人,我们用的是BD的试剂,如果换位思考,我觉得我当时可能加做CCD22  ...

是的,胞内CD22做的,我刚才忘记说了。
cyCD22两次做的都是阴性,胞膜的CD22两次也都阴性。
所以这个病人分化很差,幸亏cyCD79a的表达才能帮助我下了诊断。
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 楼主| 发表于 2013-11-28 22:26:52 | 显示全部楼层
evadj86 发表于 2013-11-28 21:56
用BD的机器跑也没关系吗?因为之前用溶血素时发现用BC的溶血素之后在calibur上跑出来图形分群不好。还有 ...

BC的溶血素我没用过,我只是用了Perfix nc这个破膜剂(这个破膜剂是做核内抗原的)。
TdT说起来惭愧,我一直没做,就因为太贵。而且似乎主要还是用在原始程度的判断上。所以综合考虑,就不做了。
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