流式细胞术检测白细胞碱性磷酸酶（LAP）

niwanmao

白细胞碱性磷酸酶（LAP）积分目前仍然是很多基层医院或无法开展分子生物学检测的医院进行慢性粒细胞白血病与类白血病反应鉴别诊断的重要辅助手段。
虽然该积分并没有特异性，但对于CML和类白血病反应这样的特定症状，该积分还是有很大的意义的。
本文采用流式细胞术，抗体采用CD16 FITC/ LAP PE/ CD14 ECD/ CD45 PC5四色，其中LAP PE为R＆D公司，其它为Beckman公司的。并提出一个LAP指数，即LAP的阳性率×LAP的平均荧光强度，该指数很好的区分出组化时正常、低、高三种水平的LAP积分（见图3）

图1 设门策略

图1 设门策略

图2 内对照

图2 内对照

图3 各类疾病或状态对应的流式LAP积分

图3 各类疾病或状态对应的流式LAP积分

原文地址：http://www.mlo-online.com/articles/201308/leukocyte-alkaline-phosphatase-lap-by-flow-cytometry.php

dragonhzqsmmu

学习了，提一个问题：碱性磷酸酶流式细胞染色不需要破膜吗？看链接里面没有提到破膜的问题，直接染色可以吗？

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-12-13 14:36:23

                               
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学习了，提一个问题：碱性磷酸酶流式细胞染色不需要破膜吗？看链接里面没有提到破膜的问题，直接染色可以吗

真是问到点子上了，碱性磷酸酶看名称似乎属于胞内的，确实也想不通为什么不需要破膜    晚上回去查查资料看

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-12-13 14:36
学习了，提一个问题：碱性磷酸酶流式细胞染色不需要破膜吗？看链接里面没有提到破膜的问题，直接染色可以吗 ...

找到原因了，原来是我们理解错了，看这篇文献的摘要第一句话：白细胞碱性磷酸酶是一种表达在中性粒细胞膜外侧的酶，它是完全分化的粒细胞特异性标记。（http://link.springer.com/chapter ... 42-71960-8_8#page-1）

dragonhzqsmmu

就这点多问两个问题，LZ别见怪啊

因为我们也准备做类似的实验，不过不是外周血白细胞而是干细胞的ALP的表达，查了不少文献都是需要破膜的，这两天看了一些文献还有用ALP特异性的荧光底物来进行流式细胞检测的，不知道这个与版主给出的文献用抗体检测的差别何在？

这些方法好像与版主给出的检测ALP的侧重点有所不同，就其中一篇文献出的荧光图片（它做的不是普通的细胞）来看它的ALP在胞内

在其中的一篇invitrogen有关特异性荧光底物EL97-1的说明书中看到“如果进行破膜处理的话细胞ALP的荧光强度会比较高”

如果用这些荧光底物来代替抗体的话是否会降低相应的费用，但是否对流式细胞仪的硬件的要求更高（EL97好像需要紫外激光激发，普通的两激光机器，诸如BD的Calibur等好像对此无能为力啊）

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2013-12-13 21:15
就这点多问两个问题，LZ别见怪啊

因为我们也准备做类似的实验，不过不是外周血白细胞而是干细胞的ALP的表 ...

这个叫LAP，即leukocyte alkaline phosphatase（白细胞碱性磷酸酶），是中性粒细胞分化到终末阶段（即分叶核）时，表面表达的磷酸酶活性，在血液系统疾病CML和类白血病反应中区分中性粒细胞的性质。

你所说的ALP是指细胞内部的碱性磷酸酶，应该是干细胞或其中肿瘤性细胞内的，跟这里说的LAP还是有所不同的。