原代细胞的细胞周期分析

sally_no10

我自己以前做了很多次周期的分析,也不算是个新手了.今天帮老同学做,遇到比较麻烦的事情.
他是皮肤科的,取了炎性包皮的手术切除标本,分了原代角质上皮细胞做周期分析.(Calibur, PI, FL-2, ModFit)
别的先不说.我帮他上的机.发现出来的峰杂乱不堪.没法做进一步的分析.
我分析是原代分下来以后,杂细胞太多.而各种杂细胞在前向侧向以及FL2-W FL2-A里差异不大,没法很好的分群出来.
我建议他上标分选或者分群后再做DNA含量检测.哥们说经费和精力有限.
我现在的问题是,有没有站友有过类似的处理经验.因为我之前做的都是纯细胞系的周期分析,对这种杂细胞较多,细胞大小和DNA含量差异又不大的情况没太多经验.我是觉得如果不分选或者上个标记分群圈,是没办法分析的.
集思广益,看看有没有好的办法.
上张图吧,也许有站友想看看.(别太在意门的位置,我试着拉动了几次,没有太大的区别.索性就随便圈了)

niwanmao

这个分布我觉得在原代标本里面算好的了。CV值对于实体标本来说肯定偏大的，就这么拟合吧。
如果他还要判断异倍体的话，就再加做一个鸡红细胞作为倍体参照物。

sally_no10

niwanmao 发表于 2013-12-9 10:15
这个分布我觉得在原代标本里面算好的了。CV值对于实体标本来说肯定偏大的，就这么拟合吧。
如果他还要判断 ...

是吧.我后来查了一下.他这个原代实际上包含了表皮的分层.角质层,颗粒层,透明层还有棘层.每层的细胞来源是相同的,只是在分化程度和时间上有一定的差异.原则上说都属于同样来源的细胞.单纯的上表皮的标记,是难以区分的,也不应该区分开.我也打算就这么拟合.我查阅了相关的文献,别人以前做的,要么拟合的也是这样,要么就干脆没拟合,直接用Height做分布.
我想就先这么做好了.
另外,我手上有一段时间前冻存的鳖红.做参照也可以用吧?

niwanmao

sally_no10 发表于 2013-12-9 13:55
是吧.我后来查了一下.他这个原代实际上包含了表皮的分层.角质层,颗粒层,透明层还有棘层.每层的细胞来源是 ...

可以试试吧。

mayi009

请教一个问题：楼主这张图里面，G1峰左边这个高高的长方形是什么？什么情况下会出现这个？我用modit分析周期时也遇到过，如果调整门的位置，它的大小会随着门的位置变化，门调整到某个位置它也可能会消失。一直不知道它的出现是说明什么情况？

niwanmao

mayi009 发表于 2013-12-24 16:16
请教一个问题：楼主这张图里面，G1峰左边这个高高的长方形是什么？什么情况下会出现这个？我用modit分析周 ...

这应该是拟合后的噪音，不用管的。具体为什么出现这个框框，我也无法解释，或许verify的技术人员能够讲清楚

mayi009

谢谢。呵呵，我也是这样回答学生的。