PMA，离子霉素孵育4h，全血凝固

liyi881228

检测胞内IFN-r，外周血1:1使用无血清的1640培养基稀释，样本用PMA，离子霉素和BFA刺激4h，对照用BFA刺激4h，空白只有血液，加入PMA的培养皿血液都凝固了，用枪头戳了一下是一层膜无法混开成液体，只加BFA刺激的也有点小絮状，不过用枪头稍微混了一下还是可以混匀的，什么都没加的空白还是液体的血液好好的，这是哪出问题了啊，好着急

liyi881228

忘了说，我的血液是EDTA抗凝管采集的，这个有影响吗

niwanmao

liyi881228 发表于 2013-12-16 15:03
忘了说，我的血液是EDTA抗凝管采集的，这个有影响吗

好像都没听说过这种事情嘛。 加PMA之前都好的？PMA有没有问题？

liyi881228

niwanmao 发表于 2013-12-16 15:08
好像都没听说过这种事情嘛。 加PMA之前都好的？PMA有没有问题？

对呀，有一孔是稀释血液，没加PMA和BFA还是液体状态，好好的，PMA是新买的250X的，只加了1.6ul/400ul稀释血液

niwanmao

liyi881228 发表于 2013-12-16 16:31
对呀，有一孔是稀释血液，没加PMA和BFA还是液体状态，好好的，PMA是新买的250X的，只加了1.6ul/400ul稀释 ...

有时候或许是这份血液标本的问题，其它标本上有没有出现过此现象。就象我们在临床上一次碰到一例病人，染色结束后，整个标本变成了黑色颗粒，但这种标本属于很少见的，参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2289-1-1.html

luxj807

liyi881228 发表于 2013-12-16 15:03
忘了说，我的血液是EDTA抗凝管采集的，这个有影响吗

不能用ETDA采集，只能用sodium heparin （肝素钠）这是BD提供的资料
Whole Blood
Collect blood for whole blood activation assays into sodium heparin VACUTAINER tubes (BD VACUTAINER Cat. No. 367673).
FastImmune assays are incompatible with lithium heparin, EDTA, and ACD anticoagulants.
For best results, assay blood within 8 hours of collection. If blood cannot be used within 8 hours, store VACUTAINER tubes horizontally at room temperature.

liyi881228

luxj807 发表于 2013-12-17 15:39
不能用ETDA采集，只能用sodium heparin （肝素钠）这是BD提供的资料
Whole Blood
Collect blood for whol ...

非常感谢，换用肝素抗凝的血没有出现凝固的问题了，可是加PMA和BFA刺激4个小时IFN-r的比率超级低，和只加BFA的比只上升了0.5%不到，又做了PMA浓度梯度，加了0.5、1、2倍推荐浓度，结果也是IFN-r比例上不去，郁闷死了

luxj807

liyi881228 发表于 2013-12-19 10:04
非常感谢，换用肝素抗凝的血没有出现凝固的问题了，可是加PMA和BFA刺激4个小时IFN-r的比率超级低，和只加 ...

只加PMA和ION刺激，不加BFA，做一下CD69.看CD69有没有表达90%以上。有的话那就是BFA的问题了，换。

lindsaylee

LZ的离子霉素都是在哪个公司购买的？

niwanmao

lindsaylee 发表于 2014-6-17 14:16
LZ的离子霉素都是在哪个公司购买的？

离子霉素sigma有的