有谁用未裂解的全血细胞检测CD3，CD4和CD8，求方法或相关...

小呆

有谁用未裂解的全血细胞检测CD3，CD4和CD8，求方法或相关文献
我尝试了用全血做，对同一只动物连续几天检测，但是稳定性不高。
而且用裂解的全血检测，同样稳定性不高，求解！！！

全血上样

                             

裂解后上样

                       全血上样                                                                                               裂解后上样

niwanmao

小呆 发表于 2013-12-16 16:22
不稳定是天数之间的不稳定，最大的能差上将近2倍呢，其余处理条件也一样的 ...

应该还是你获取的细胞数量太少有关，所以结果波动会比较大，建议你全血用量可以大一些。

至于计算，象你描述这样就是20ul稀释到350ul，稀释倍数是17.5倍，上机后获得的CD3＋细胞浓度是1200/20=60个/ul，所以原来就是60×17.5＝1050个/ul，换算成ml就是1050000/ml，科学计数法是1.05×10E6/ml。

niwanmao

如果测淋巴细胞亚群，肯定得裂解，不裂解的话淋巴细胞容易受红细胞及其碎片干扰，无法排除。

至于您说的裂解后同样不稳定，指的是什么情况？是指每次测都不一样还是同一管标本连续测两次不一样？

小呆

niwanmao 发表于 2013-12-16 15:38
如果测淋巴细胞亚群，肯定得裂解，不裂解的话淋巴细胞容易受红细胞及其碎片干扰，无法排除。

至于您说的裂 ...

不稳定是天数之间的不稳定，最大的能差上将近2倍呢，其余处理条件也一样的

小呆

niwanmao 发表于 2013-12-16 15:38
如果测淋巴细胞亚群，肯定得裂解，不裂解的话淋巴细胞容易受红细胞及其碎片干扰，无法排除。

至于您说的裂 ...

如果用全血做的话，我那样圈的是不是合适？

小呆

niwanmao 发表于 2013-12-16 15:38
如果测淋巴细胞亚群，肯定得裂解，不裂解的话淋巴细胞容易受红细胞及其碎片干扰，无法排除。

至于您说的裂 ...

取20ul全血与2.5ul抗体孵育，然后裂解，上样体积是350ul，得到CD3的数量是1200，进样体积是20ul，那么如何计算每ml全血中的CD3数量（绝对数量）？能不能给一下具体计算公式，想确认自己的计算是否正确，非常感谢！

小呆

niwanmao 发表于 2013-12-16 15:38
如果测淋巴细胞亚群，肯定得裂解，不裂解的话淋巴细胞容易受红细胞及其碎片干扰，无法排除。

至于您说的裂 ...

上面计数是计数了5000个细胞（没有圈明什么细胞，只跑5000个）

dragonhzqsmmu

小呆 发表于 2013-12-16 16:27
上面计数是计数了5000个细胞（没有圈明什么细胞，只跑5000个）

这个是用millipore的guava跑的吗？这个好像与老式的机器相比，因为是毛细管的鞘液原理不需要计数微球就能直接计数了

dragonhzqsmmu

小呆 发表于 2013-12-16 16:26
取20ul全血与2.5ul抗体孵育，然后裂解，上样体积是350ul，得到CD3的数量是1200，进样体积是20ul，那么如 ...

裂解后有没有洗涤样本？是小鼠的全血吗？20ul的体积是否太小了？

我们做最小做过50ul的，再小感觉数据波动就很大了

小呆

dragonhzqsmmu 发表于 2013-12-16 18:34
这个是用millipore的guava跑的吗？这个好像与老式的机器相比，因为是毛细管的鞘液原理不需要计数微球就能 ...

是的，Guava的流式跑的