IFN-r检测做不出来，求救@kobe327292007

liyi881228

新鲜的肝素抗凝全血，1:1用无血清的1640培养基稀释后，分出4管A、BFA终浓度为10ug/mL；B、BFA终浓度为10ug/mL，PMA终浓度25ng/mL，Ionomycin终浓度0.5ug/mL；C、BFA终浓度为10ug/mL，PMA终浓度50ng/mL，Ionomycin终浓度1ug/mL；D、BFA终浓度为10ug/mL，PMA终浓度100ng/mL，Ionomycin终浓度2ug/mL,37℃孵育5.5h，4管都检测不出来IFN-r

冻存的PBMC复苏48h后，1x106cell/孔（12孔板），分别用A、40ug抗原刺激，BFA终浓度为10ug/mL；B、80ug抗原刺激，BFA终浓度为10ug/mL；C、BFA终浓度为10ug/mL，PMA终浓度25ng/mL，Ionomycin终浓度0.5ug/mL；D、BFA终浓度为10ug/mL，PMA终浓度50ng/mL，Ionomycin终浓度1ug/mL；E、BFA终浓度为10ug/mL，PMA终浓度100ng/mL，Ionomycin终浓度2ug/mL,37℃孵育5.5h，5管也都检测不出来IFN-r
我也不太会分析，我可以上传我的原始数据，但是貌似传不了，谁能加我Q343109263，指导我一下

niwanmao

你有上传数据的权限，现在你可以点击“编辑”帖子功能，然后点击工具栏的“附件”按钮，上传数据。这里需要注意：数据文件需要先用压缩软件压缩成zip或rar文件。

kobe327292007

才看到，不好意思。

你检测的是什么细胞表达IFN-γ？
你写了很多，但是我就想知道你用什么细胞做了对照？

我做的是NK细胞，用的是新鲜分离的PBMCs，用FITC-CD3 PE-CD56标出来NK细胞，NK细胞再用IFN抗体标记。这里介绍一下NK细胞，90％以上是CD56弱阳性，是细胞毒型NK细胞，不表达IFN-γ，而CD56强阳性表达NK细胞为细胞因子分泌型，部分表达IFN-γ，因此会出现这个结果：


如图所示你就能看出来，真正表达IFN-γ的是CD56(bright) NK细胞。

liyi881228

我测的是淋巴细胞中的CD3+CD8+IFN-r+，我发现一个很奇怪的现象，我用只加BFA的样本调好补偿后，跑PMA刺激的样本又会偏掉，感觉白调补偿了，我现在用的是新鲜血液来做预实验，条件摸好了后，要用冻存的PBMC来做实验

liyi881228

kobe327292007 发表于 2013-12-21 12:17
才看到，不好意思。

你检测的是什么细胞表达IFN-γ？

我测的是淋巴细胞中的CD3+CD8+IFN-r+，我发现一个很奇怪的现象，我用只加BFA的样本调好补偿后，跑PMA刺激的样本又会偏掉，感觉白调补偿了，我现在用的是新鲜血液来做预实验，条件摸好了后，要用冻存的PBMC来做实验