监测败血症的新指标－幼稚粒细胞和高荧光淋巴细胞

niwanmao

2014年1月份的Journal of Clinical Laboratory Analysis发布了一篇《Novel Parameters of Extended Complete Blood Cell Count under Fluorescence Flow Cytometry in Patients with Sepsis》，认为CRP和PCT（原降钙素）在败血症发生等方面监测不够灵敏，介绍了监测败血症的新指标－幼稚粒细胞（IG，Immature granulocyte）和高荧光淋巴细胞（HFLC，High fluorescence lymphocyte cell），这两个指标在血常规仪器上可以很方便圈出（如下面两幅我从Sysmetex网站找来的图，就分别代表IG和HFLC）。有兴趣的朋友可以在流式细胞仪上试试：）

幼稚粒细胞

高荧光淋巴细胞

该文介绍了一例尿路感染的患者发展到败血症过程中各种炎症指标的变化（如下图），可看到IG和HFLC变化明显。

图1

通过对22例正常人、10例局部感染的患者和6例败血症患者对比发现，IG和HFLC均存在明显差异。
【流式中文网注：个人觉得HFLC差别不够明显，可能由于例数少，导致平均值很容易受最大值的影响，还需要更多例数来完善】

图2

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2014-1-9 22:17 上传

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，下载需要1颗流星（为什么？）

dragonhzqsmmu

学习一下，多谢LZ共享

坚强顶住

败血症没有实际碰到过，不知道倪老师对此诊断有何高见！

niwanmao

坚强顶住 发表于 2014-1-22 20:26
败血症没有实际碰到过，不知道倪老师对此诊断有何高见！

还需要做做看才知道。败血症诊断方面，除了常规的感染性指标、细菌培养等，免疫学方面的指标改变可能也可以做。

dragonhzqsmmu

HFLC.pdf (1.82 MB, 下载次数: 3)

2014-1-26 12:21 上传

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倪老师，上面的图是从xe-2100机器上截出来的，我看Y轴的通道与流式细胞仪的通道不一致，不知道在流式细胞仪上如何实现啊？

有几篇文章谈到这个机器与流式细胞仪结果的比较，但好像没有给出如何用流式细胞仪实现IG和HFLC的方法啊？

Sensitivity and specificity of the high fluorescent lymphocyte count-gate on the Sysmex XE-5000 hematology analyzer for detection of peripheral plasma cells

另外有一篇该公司有关这个机器与calibur的比较的全文我放附件里面了，请各位高手帮忙看看如何用流式细胞仪来实现上述的检测？

此外在网上查到XE-2100的仪器相关说明书，里面有涉及原理方面的东西，看样子就是个简化的流式细胞仪，但具体如何实现相关的图形，用的抗体染料没有写出来（应该是涉及专利保护），不知道有没有高手能出图里面的信息倒推出来他具体用的是什么抗体marker标记的细胞，这样就可以试试了

有关HFLC，我查到的资料是说” The immature granulocyte measurement,which includes promyelocytes, myelocytes, and metamyelo cytes but not bands or blasts, is performed in the differential channel. A lysing reagent causes disruption of mature WBC membranes, leaving bare nuclei, while immature myeloid cells with low cell membrane lipid content remain intact. Subsequently, the cells are analyzed by nucleic acid fluores-cence and side scatter; “
应该就是用一种特殊的裂解液裂去成熟白细胞的细胞膜，而幼稚白细胞因为膜含量少不会被裂解，随后再通过一种核酸染料去染色分析，最后出的图是侧向散射与荧光的联合，但这里面涉及的东西比较多，原理大家都OK，就不知道who能用流式细胞仪重复出来，至少我们科没有这个sysmex机器没法重复上述的结果

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2014-1-26 11:29
倪老师，上面的图是从xe-2100机器上截出来的，我看Y轴的通道与流式细胞仪的通道不一致，不知道在流式细 ...

这个组分倒是公开的，在官方网站上有：http://www.sysmex.ch/files/f1/Image/pic_305/techrep.pdf

就是polymethine，我查了下叫“聚甲炔”，首需用STROMATOLYSER-4DL为主的表面活性剂裂解红细胞和血小板，并在白细胞膜上打孔，最后用溶解在STROMATOLYSER-4DS中的polymethine染白细胞的核酸、胞内细胞器。

The surfactant contained in STROMATOLYSER-4DL lyses and dissolves erythrocytes and platelets and makes holes in the leukocyte membrane, after which the polymethine dye contained in STROMATOLYSER-4DS enters white blood cells and stains nucleic acids and cytoplasmic organelle, such as endoplasmic reticula.

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2014-1-26 16:37
这个组分倒是公开的，在官方网站上有：http://www.sysmex.ch/files/f1/Image/pic_305/techrep.pdf

就是p ...

我查过这个”STROMATOLYSER-4DS“就是所谓的全自动血细胞分析仪溶血素，但具体的配方不清楚，不知道是否是基于氯化铵裂解液，估计可能加入Trtion X100或者Tween

另外那个polymethine不知道能否用hochest（紫外激发的DAPI）或者PI/Picogreen等类似的核酸染料代替？

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2014-1-26 21:54
我查过这个”STROMATOLYSER-4DS“就是所谓的全自动血细胞分析仪溶血素，但具体的配方不清楚，不知道是否 ...

是的，这种溶血素的具体成份我们肯定没法知道，如果要试，只能摸索对比。

至于polymethine，肯定没法用PI这些核酸染料代替，还是不一样的：http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S1389556711000876

dragonhzqsmmu

niwanmao 发表于 2014-1-26 22:08
是的，这种溶血素的具体成份我们肯定没法知道，如果要试，只能摸索对比。

至于polymethine，肯定没法用P ...

LZ链接里面的plymethine dye我看这篇文献里面提及SYBR Green和picoGREEN也属于其中，是不是能试试？

niwanmao

dragonhzqsmmu 发表于 2014-1-27 14:50
LZ链接里面的plymethine dye我看这篇文献里面提及SYBR Green和picoGREEN也属于其中，是不是能试试？ ...

SYBR Green和picoGREEN似乎只能和核酸结合吧？而polymethine既可结合核酸，又可结合蛋白质，应该还是不同的。我没有细读，但感觉应该就这个区别。