关于同型对照

xlswy1984

请问，关于同型对照，是不是每个标本都需要有一个同型对照？
还是和单标补偿一样，设置好了，短期可以不用再做。
另外，同型对照和抗体如果一家是Biolegend，一家是BD的，可以么？

xlswy1984

如果有有这几种抗体，应如何设置补偿管和同型对照。样本为全血
编号1.  PerCP-cy5.5   CD45
编号2.  PE-Cy 7         HLA-DR
编号3.  PB                CD14
编号4.  APC              CD16
编号5.  PE                CCR2         编号7.  PE                CD36
编号6.  FITC             CD69         编号8.  FITC             CD9
问题：
1.这是不是应该设在两个实验中？
实验一
unstained
单标-1
单标-2
单标-3
单标-4
单标-5
单标-6
sample+1.2.3.4.6+PE isotype
sample+1.2.3.4.5+FITC isotype
sample+1.2.3.4.5.6

实验二
unstained
单标-1
单标-2
单标-3
单标-4
单标-7
单标-8
sample+1.2.3.4.8+PE isotype
sample+1.2.3.4.7+FITC isotype
sample+1.2.3.4.7.8

2.我只做了后面两个单抗的同型，是不是每个单抗都要做同型啊？
  如果我的不正确，那应该是怎么样的？

niwanmao

xlswy1984 发表于 2014-1-13 17:12
如果有有这几种抗体，应如何设置补偿管和同型对照。样本为全血
编号1.  PerCP-cy5.5   CD45
编号2.  PE-Cy  ...

你最终要分析的指标是哪些？

xlswy1984

niwanmao 发表于 2014-1-13 19:33
你最终要分析的指标是哪些？

CD45, HLA-DR, CD14,CD16用来进行单核细胞分群，
后面的 PE 和FITC 染色的都是要测的指标：CCR2,CD69,CD36,CD9

niwanmao

xlswy1984 发表于 2014-1-14 05:46
CD45, HLA-DR, CD14,CD16用来进行单核细胞分群，
后面的 PE 和FITC 染色的都是要测的指标：CCR2,CD69,CD3 ...

补偿可以通过各种单色荧光调节，一次调节后，以后都通用。

至于设门，还是用fmo对照更好。

xlswy1984

niwanmao 发表于 2014-1-14 09:22
补偿可以通过各种单色荧光调节，一次调节后，以后都通用。

至于设门，还是用fmo对照更好。 ...

FMO 用在我这样的实验里，该怎么设置呢？
我的理解对么？   FMO-CCR2即 sample+1.2.3.4.6， FMO-CD69 即sample+1.2.3.4.5？
如果设了FMO，那还需要我上面说的那样的 同型对照么？
是不是还要设 FMO-CD36  sample+1.2.3.4.8，  FMO-CD9 sample+1.2.3.4.7？
另外，每调好补偿以后。补偿可以一直用。那是不是每次都要设FMO?

niwanmao

xlswy1984 发表于 2014-1-14 16:15
FMO 用在我这样的实验里，该怎么设置呢？
我的理解对么？   FMO-CCR2即 sample+1.2.3.4.6， FMO-CD69 即s ...

因为你这4个指标都要分析，所以FMO对照这4个都要。用了FMO，我认为同型就不用了。

补偿可以一直用，但是FMO尽可能一批标本做一次，实在成本所限，那么可以试试同一种细胞做一次。

xlswy1984

niwanmao 发表于 2014-1-14 20:12
因为你这4个指标都要分析，所以FMO对照这4个都要。用了FMO，我认为同型就不用了。

补偿可以一直用，但是 ...

倪老师，那再请教一下，上面的这个设置是全血标本的。
如果，我直接用单核细胞来做FACS，那么单核细胞的分群就之需要CD14,CD16了。
那么如果我还要测 PE-CCR2, FITC-CD69, PE-CD36, FITC-CD9。这个实验就变成了四色荧光的流式。
这个时候，我是应该设置同型对照，还是FMO?

niwanmao

xlswy1984 发表于 2014-1-14 20:25
倪老师，那再请教一下，上面的这个设置是全血标本的。
如果，我直接用单核细胞来做FACS，那么单核细胞的 ...

CD14是PB，CD16是APC，跟FITC、PE没有干扰，这时我觉得只需要设两管FMO：
一管  CD14＋CD16＋FITC
一管  CD14＋CD16＋PE

xlswy1984

niwanmao 发表于 2014-1-14 21:18
CD14是PB，CD16是APC，跟FITC、PE没有干扰，这时我觉得只需要设两管FMO：
一管  CD14＋CD16＋FITC
一管   ...

不好意思，那我又糊涂了。
请问，那一般什么时候需要设置同型对照呢？
还有我的分析的这几个指标，是应该用百分比还是用 平均荧光强度呢？我觉得这几个指标是不会有明显的分群的？