表面抗原检测，封闭的问题

willow2013

做流式检测，测细胞表面抗原的，发现在细胞样本制备过程中，有人在检测样本管的细胞中加小鼠的血清封闭15min，之后再加各种直接标记的抗体，说可以减少非特异性吸附，想问下倪老师，1）这种封闭液加与不加结果差异大吗？2）如果测人细胞表面抗原，用鼠抗人的抗体标记，是不是封闭时一定要用小鼠的血清？


3）想请倪老师给个比较常用的，测细胞表面抗原时，细胞样本处理的步骤，谢谢啦

niwanmao

（1）一般说来，现在大多数单克隆抗体的特异性还是不错的，所以加不加问题不大，不过对于一些多克隆抗体或特异性较差的单抗，还是建议封闭。

（2）如果用鼠抗人抗体测人细胞表面抗原，可用如下封闭液，在抗体标记之前作用15分钟并洗涤：
0.05 M Tris缓冲液，pH 7.4
1%正常小鼠血清或0.1mg/ml 小鼠IgG
2％胎牛血清
0.1％叠氮钠

（3）细胞表面染色的步骤以前发过几个：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-213-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-711-1-1.html

willow2013

niwanmao 发表于 2014-2-20 12:29
（1）一般说来，现在大多数单克隆抗体的特异性还是不错的，所以加不加问题不大，不过对于一些多克隆抗体或 ...

倪老师，你发的链接找不到

niwanmao

willow2013 发表于 2014-2-20 15:18
倪老师，你发的链接找不到

不好意思，中午发的时候仓促间把两个链接并在一起，乱掉了。

shankelj1991

倪老师，我做的是多标的分选，买的有鼠抗人和兔抗人抗体，封闭的时候找到的Human FcR block说明书上写的针对鼠抗人抗体The human FcγR-binding inhibitor can be used to inhibit the non-specific Fc-gamma receptor (FcγR)-mediated binding of mouse monoclonal antibodies used for flow cytometric analysis of human tissue.那我这还能用么。。

niwanmao

shankelj1991 发表于 2015-7-6 13:58
倪老师，我做的是多标的分选，买的有鼠抗人和兔抗人抗体，封闭的时候找到的Human FcR block说明书上写的针 ...

不知道，先用用看吧

mcdfish

niwanmao 发表于 2014-2-20 12:29
（1）一般说来，现在大多数单克隆抗体的特异性还是不错的，所以加不加问题不大，不过对于一些多克隆抗体或 ...

倪老师，胞内染色的背景很高，封闭FC受体有用吗

mcdfish

niwanmao 发表于 2015-7-6 15:23
不知道，先用用看吧

倪老师，胞内染色的背景很高，封闭FC受体有用吗？如果加的话是在表面染之前加还是破膜之后加？

niwanmao

mcdfish 发表于 2016-4-6 13:34
倪老师，胞内染色的背景很高，封闭FC受体有用吗？如果加的话是在表面染之前加还是破膜之后加？
...

胞内染色是因为固定剂和破膜剂的影响，非特异性染色确实强，这个问题目前还没有很好的办法解决。Fc封闭只对表面抗原有用。