求助，ebioscience的细胞因子问题

遗落的沙罗

最近一年在做细胞因子的实验，做的因子如下：IL1a,IL1beta ,tnf-a,IL2,IL4,IL5,IL6,IL 10, IL12,IL15,IL17,INF。
之前一直做得很好，但昨晚出现了以下问题：
刚开始，实验一直顺利，标准曲线和样品的图都挺好的，如下图所示：


突然做到一个样，发现微球全部沉到FCS/SSC图的地步去了，要把FSC/SSC的电压增大才可以把微球的位置上去，而且还发现直方图里本来分的很好的峰变得很差，CV值由之前8%增加到82%。一开始以为是这管样品自己处理的不好，于是试着做下一管，发现问题同样存在。

所以我就把之前做过的其中一个结果较好的样品重新进样，发现结果也变得不好了，由于只间隔了几分钟，同一样品的结果会差别如此的明显，所以排除了自己这次处理样品出误差的可能。应该是机器出问题了。

可能进气泡了吗？于是我排了气泡
可能是流动池赌赛吗？清洗过几次观察流动池，情况良好
进样针漏气吗？于是更换了O圈
机器的激光出状况了吗？观察蓝光的数值，正常
机器的压力也一直正常，也把气泵的气泡排过，最高速反冲清洗，这些都试过

结果是没有改善，现在实验只能停下，请教工程师，暂时也解决不了问题，真是郁闷。

在这里想向各位请教一下，到底哪里出问题了 怎么解决 万分感谢

niwanmao

是机器的问题，不过可能是因为堵，因为没有堵彻底，所以就变这样子。
你可以试试我前些天介绍的DIY冲堵小绝招：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3159-1-1.html，相信应该可以手到病除。

遗落的沙罗

niwanmao 发表于 2014-2-27 18:42
是机器的问题，不过可能是因为堵，因为没有堵彻底，所以就变这样子。
你可以试试我前些天介绍的DIY冲堵小绝 ...

谢谢您的帮助   照您的方法  问题解决   主要之前用惯了aria  CANTOII只用了半年  不清楚怎么处理进样针堵塞   十分感谢

niwanmao

遗落的沙罗 发表于 2014-2-28 18:12
谢谢您的帮助   照您的方法  问题解决   主要之前用惯了aria  CANTOII只用了半年  不清楚怎么处理进样针 ...

本来进样针堵都需要叫工程师的，而且拆卸下来会影响光路，这个方法是我自己在实践中摸索出来的，试了之后非常有效，故分享给大家。能帮到你非常高兴

mcdfish

遗落的沙罗 发表于 2014-2-28 18:12
谢谢您的帮助   照您的方法  问题解决   主要之前用惯了aria  CANTOII只用了半年  不清楚怎么处理进样针 ...

楼主能否分享下胞内染色的步骤？想借鉴下

niwanmao

mcdfish 发表于 2016-3-14 17:17
楼主能否分享下胞内染色的步骤？想借鉴下

@遗落的沙罗 做的是血清中的细胞因子，不是细胞内的。胞内的染色按照不同的破膜剂而不同，可参考你购买的破膜剂说明书。