单染CD105-PE的流式图有疑问

草易木

想问FL1 Log这个通道没有染色，为什么FL1 Log直方图会有两个峰出现呢？我用的是贝克曼的仪器FC500和试剂。这个实验我只是用CD105-PE染了标本，其直方图也是两个峰。

草易木

想知道为什么FL1 Log直方图会有两个峰出现。我的标本是培养的肿瘤细胞。

yuemin5

我的感觉要么你培养的细胞不纯，有自发荧光，要么就是补偿没调好

珊珊

yuemin5 发表于 2014-3-25 00:12
我的感觉要么你培养的细胞不纯，有自发荧光，要么就是补偿没调好

你的细胞是不是转染过GFP？要不然就是Fl2通道的漏光。

niwanmao

建议你把FSC/SSC、FL1/FL2两个散点图都放上来。估计是非特异性荧光造成。

草易木

这个是FL1/FL2的散点图

草易木

niwanmao 发表于 2014-3-25 13:56
建议你把FSC/SSC、FL1/FL2两个散点图都放上来。估计是非特异性荧光造成。

我的细胞只染了CD105-PE，所以不存在调荧光补偿问题。

草易木

yuemin5 发表于 2014-3-25 00:12
我的感觉要么你培养的细胞不纯，有自发荧光，要么就是补偿没调好

我也在怀疑是不是因为细胞不纯。但是分出这么明显的两个峰，道数相隔这么远，真不知道为啥会这样。

niwanmao

草易木 发表于 2014-3-25 22:30
我的细胞只染了CD105-PE，所以不存在调荧光补偿问题。

非特异性荧光不等于荧光补偿，指的是由于细胞状态不佳，或实验过程中其它处理因素而造成的，你将FL1和FL2的散点图传上来，我们看一下就知道。

草易木

珊珊 发表于 2014-3-25 10:22
你的细胞是不是转染过GFP？要不然就是Fl2通道的漏光。

没有转染。这个数据只染了单色的PE。FL1这个通道没有染色，难道也会因为FL2漏光而使FL1有信号出现吗？