Brdu-7AAD检测细胞增殖

周利

各位大虾，最近看了一个BD的FITC BrdU Flow Kit，里面有一个这样的图它得到了如下结论，

Region Cell population
R3 G0/G1
R4 S phase
R5 G2 + M
R6 apoptotic


求指导，是怎么得到以上结论的

周利

我在老师发的哺乳动物周期检测和分析视频里找到了答案，还有和我一样不明白的可以去看看

niwanmao

周利 发表于 2014-4-9 16:59
我在老师发的哺乳动物周期检测和分析视频里找到了答案，还有和我一样不明白的可以去看看 ...

横坐标7-AAD检测的是DNA含量，根据DNA含量区分三个期，然后BrdU是检测细胞增殖能力的，参与DNA合成，因为S期是DNA合成阶段，所以BrdU会掺入。

周利

niwanmao 发表于 2014-4-9 18:57
横坐标7-AAD检测的是DNA含量，根据DNA含量区分三个期，然后BrdU是检测细胞增殖能力的，因为S期是细胞增殖 ...

可是老师，在那个视频里，Brdu只有在S期掺入了，其他两个时相没有Brdu啊

周利

niwanmao

周利 发表于 2014-4-9 19:20
可是老师，在那个视频里，Brdu只有在S期掺入了，其他两个时相没有Brdu啊

嗯，是的，我前面没说清楚，现已改正，BrdU可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期）参与DNA合成的，而只有S期有DNA合成行为，故S期会表达。谢谢提醒。

周利

老师，那这样的话，似乎Brdu没有起什么作用，因为它的结果就是PI直方图周期拟合后S期的百分比啊，和周期结果无异，那为什么还要用它呢？

didi_zhou

周利 发表于 2014-4-9 21:00:55

                               
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老师，那这样的话，似乎Brdu没有起什么作用，因为它的结果就是PI直方图周期拟合后S期的百分比啊，和周期结果无异，那为什么还要用它呢？...

R4门反应了掺入BrdU后进入S期的细胞比例，与S并不完全相同。通过对照实验，BrdU才是反应细胞增殖数度的数据。而单纯的S期比例不能直接反应增殖速率的，他单纯就是个比例。BrdU掺入实验一定要注意检测时间，对于永生化的细胞一定不能超过一个细胞周期，否则BrdU在细胞内的累积会越来越多，就算是细胞回到G0/G1期也会是BrdU阳性的。