PNH方案

zbhua123 · 发表于 2014-4-22 19:07:01

哪位老师可以提供一下BD的PNH试剂的样本处理方案啊（CD55,CD59）

葡萄粒 · 发表于 2014-4-22 19:24:47

三管，第一管空白
         第二管  CD59 FITC
         第三管  CD55 PE
      加全血  3ul 即可，补充盐水或PBS 50ul  ,染色 15min ,洗两遍上机。
   注：在加抗体之前可以用PBS多洗2遍样本这样效果更好。

niwanmao · 发表于 2014-4-22 19:38:54

可以直接用CD55 PE和CD59 FITC双标，同时用一管正常人外周血做阳性对照即可。单标的话，有时候可能敏感性不如双标。

zbhua123 · 发表于 2014-4-22 19:45:46

请问白细胞是先溶血后标记好呢，还是先标记后溶血好些

葡萄粒 · 发表于 2014-4-22 19:53:46

zbhua123 发表于 2014-4-22 19:45
请问白细胞是先溶血后标记好呢，还是先标记后溶血好些

先标记后溶血

niwanmao · 发表于 2014-4-22 20:27:07

zbhua123 发表于 2014-4-22 19:45
请问白细胞是先溶血后标记好呢，还是先标记后溶血好些

PNH是粒细胞和红细胞均需要检测。
比较粗的检测：
1、红细胞－－取1ul外周血与抗体孵育，无需裂解，洗涤后上机，FSC、SSC均用Log。
2、粒细胞－－取100ul外周血与抗体孵育，15分钟后用红细胞裂解液裂解，洗涤，上机，FSC、SSC均用Lin。
如果要做得细，就需要加入一些系列特异性单抗。

zbhua123 · 发表于 2014-4-23 13:35:59

非常感谢各位提供帮助

zbhua123 · 发表于 2014-4-23 16:18:54

另外问一下两位老师，正常样本做不到90%以上是什么原因呢，是样本处理的问题么

niwanmao · 发表于 2014-4-23 18:55:58

zbhua123 发表于 2014-4-23 16:18
另外问一下两位老师，正常样本做不到90%以上是什么原因呢，是样本处理的问题么 ...

如果在图形上看到较多的拖尾，可能是标本放置时间过长，或者染色不均匀等原因造成的，建议重做或重抽标本。

FCMao · 发表于 2014-8-20 21:15:14

niwanmao 发表于 2014-4-23 18:55
如果在图形上看到较多的拖尾，可能是标本放置时间过长，或者染色不均匀等原因造成的，建议重做或重抽标本 ...

@niwanmao 倪老师，你好。我第一次做CD55和CD59。您能帮我分析一下嘛？为什么粒系检测到表达缺失，而红系没检测到呢？我设门有问题吗？是因为这个人治疗的原因吗？同时做了正常人和阴性对照。您有这方面的学习资料吗？想请教一下。谢谢！

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