关于流式图中显示的信号的问题

^_^_恕_^_^

流式细胞术中，对于荧光这类信号采用的是对数放大（如常见的FL1-H），那我就有个问题，图中细胞的FL1-H 荧光，与实际的信号理论上是什么关系？是（FL1-H)_显示= 10^{（FL1-H）实际}，还是（FL1-H)_实际= 10^{（FL1-H）显示}？还是更复杂？谢谢！

niwanmao

应该不叫放大，而叫显示上的转换。
例如FCS保存了10、100、1000三个荧光强度的信号，如果是线性，就直接用0～1000的坐标显示，这时，信号会拉的很长，如果改用Log转换后，那么就对应成1、2、3，只需要用0～3就能显示，他们之间的距离就会变得一致，细胞群的区分上就更容易了。

更深的理解，还得请高手@haven_t 等站友出来谈谈。

^_^_恕_^_^

niwanmao 发表于 2014-4-27 20:32
应该不叫放大，而叫显示上的转换。
例如FCS保存了10、100、1000三个荧光强度的信号，如果是线性，就直接用0 ...

我看原理是光电倍增管后的信号，通过前置放大器（对数放大器），即将荧光信号取对数后（说法是，原来信号是1，增大10倍后为2，增大100倍为3），然后再将该信号通过数模转化和一些处理再显示在分析图上，所以已经被弄糊涂了

niwanmao

^_^_恕_^_^ 发表于 2014-4-27 20:38
我看原理是光电倍增管后的信号，通过前置放大器（对数放大器），即将荧光信号取对数后（说法是，原来信号 ...

哦，那是calibur这类模拟型的流式细胞仪，信号经过AD转换器之后，直接储存到文件中，无法再变换回去。至于放大，应该是光电倍增管的功能，那是另外的事情了。
PS：取对数是指：原来是10，经过Log转换后成为1。

^_^_恕_^_^

niwanmao 发表于 2014-4-27 21:04
哦，那是calibur这类模拟型的流式细胞仪，信号经过AD转换器之后，直接储存到文件中，无法再变换回去。至于 ...

恩，信号是改不回去了。我关心的是图中的信号是细胞原始信号的对数（对该信号取对数），还是说原始信号是图中信号的对数？因为我想计算标记不同浓度蛋白条件下，各个蛋白浓度的饱和比例（位点饱和百分比），因此需要弄清楚该数据与原始数据的关系。谢谢！

haven_t

没有人能仅仅看图就知道确切的荧光强度，只能估计一下，如果要准确的荧光强度，直接把平均荧光强度统计值调出即可。显示通常为了比较直观地设门分析，不是为了给你读出荧光强度的，只有软件对数据进行统计才能得到精确的数值。

niwanmao

^_^_恕_^_^ 发表于 2014-4-27 21:18
恩，信号是改不回去了。我关心的是图中的信号是细胞原始信号的对数（对该信号取对数），还是说原始信号是 ...

你说“计算标记不同浓度蛋白条件下，各个蛋白浓度的饱和比例（位点饱和百分比）”，计算百分比为什么一定要知道信号算法？再说了，就算知道，转换前的数值也不是绝对荧光值，而且不同仪器还是不一样的。

如果你要计算绝对荧光强度，加上已知荧光绝对值的校准微球试试。

^_^_恕_^_^

haven_t 发表于 2014-4-28 11:41
没有人能仅仅看图就知道确切的荧光强度，只能估计一下，如果要准确的荧光强度，直接把平均荧光强度统计值调 ...

我的想法是用过量的蛋白标记细胞后，其荧光值规定为100%，其余相应的调整，看其他浓度下的蛋白标记比例。

^_^_恕_^_^

niwanmao 发表于 2014-4-28 12:50
你说“计算标记不同浓度蛋白条件下，各个蛋白浓度的饱和比例（位点饱和百分比）”，计算百分比为什么一定 ...

我的想法是用过量的蛋白标记细胞后，其荧光值规定为100%，其余相应的调整，看其他浓度下的蛋白标记比例。所以需要知道图中荧光是怎么算出的，如果是实际值或者线性放大值，这是不会影响，荧光值标准化的；但如果是对数放大后，那么就需要反向运算，在算出比值。
打个比方：显示值为1和8（最大值）；
1、如果这是线性放大或者实际值的话，那么标准化后就是，12.5%和100%；
2、如果是对数转换的（即log10(原始信号)），那么原始信号换算后就是10和10^8，那么，这样标准化的值与前面的差别是非常大的。

所以，简单讲我实质上关心的是图中显示的信号与原始信号是线性关系还是对数关系，谢谢！

^_^_恕_^_^

haven_t 发表于 2014-4-28 11:41
没有人能仅仅看图就知道确切的荧光强度，只能估计一下，如果要准确的荧光强度，直接把平均荧光强度统计值调 ...

多谢！我实质上关心的是图中显示的信号与原始信号是线性关系还是对数关系（谁是谁的对数），谢谢！