流式检测th17/treg相关问题

静静流淌入海

各位大侠们，我购买的是BD的th17/treg流式试剂盒，里面是Percp-cy5.5标的CD4，PE标的IL-17，Alexa Fluor 647标的FOXP3,既没有单色管也没有调节微球（当时厂家说不用买，现在再买时间来不及而且费用也太贵），该如何调补偿？另外我想把提出来的PBMC先保存起来，标本攒多了一块染，有什么好的简单的保存方法没有，先谢谢了！

niwanmao

PBMC冻起来应该是可以，但是需要进行条件上的摸索和确定，建议参考这篇protocol：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2104-1-1.html

至于补偿，由于你这个是配好的kit，所以没有单色可以来调节补偿的话，可以参考BD的荧光查看器里面的补偿值，在实际中进行微调。：http://www.bdbiosciences.com/res ... um_viewer/index.jsp

静静流淌入海

niwanmao 发表于 2014-5-9 12:29
PBMC冻起来应该是可以，但是需要进行条件上的摸索和确定，建议参考这篇protocol：http://www.flowcyto.cn/b ...

非常感谢您呀，倪老师！

xjwl8587

你完全可以将所有的PBMCs全部冻存在液氮中，记住是液氮中，如果你冻存在-80里面标本一周后的存活率就不行了。冻存的protocol和我们冻存细胞株是一样的。不过冻存过的细胞复苏后一定要overnight rest。如果你不rest细胞，你的Th17几乎出不来。
对于compensation，你完全可以使用你的PBMCs。BD公司也是推荐使用同样标本的PBMCs进行compensation。而且他们推荐每个标本单独做compensation。但是标本有限我觉得这个不可行。希望能有所帮助