Treg Th17检测

zxxfighting · 发表于 2014-5-14 18:27:06

检测Th17时用PMA、离子霉素和莫能霉素刺激了4小时，然后进行检测（有经过破膜处理）；由于晚上来不及检测，加入Perm buffer和IL17抗体后放置了约10小时后才洗涤和上机检测。Treg只孵育了表面抗体，得到的结果见图。实验中碰到了如下问题，请老师帮忙解释一下：

1、检测Th17时细胞数明显减少且分群与之前检测Treg时不同2、在空白孔上圈定细胞后，后面检测的单染CD4、IL17几乎没有细胞

niwanmao · 发表于 2014-5-14 19:16:45

我觉得可能是因为破膜时间太长的缘故吧，可否试一下fix过夜，第二天做perm和胞内标记？

congou · 发表于 2014-5-15 09:05:28

我以前是固定后，放PBS中4度过夜。结果还可以。不过同连续做下去的结果比要低不少。

zxxfighting · 发表于 2014-5-15 21:54:42

congou 发表于 2014-5-15 09:05
我以前是固定后，放PBS中4度过夜。结果还可以。不过同连续做下去的结果比要低不少。 ...

请问你说的固定是指全部做完了用多聚甲醛固定还是指上面倪老师说的先固定过夜然后在做后面的实验呢。谢谢！

congou · 发表于 2014-5-16 08:34:46

用的是 BD的流式固定液。按照说明书上的时间固定后，用PBS 2%FBS 0.1%NaN3洗后重悬放4度

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[淋巴细胞相关] Treg Th17检测

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