cell stimulation cocktail (plus protein transport inhibitors)刺激时间问...

sqt

我用的是ebioscience 的 cell stimulation cocktail(plus protein transport inhibitors)说明书上说小鼠的脾细胞加5-16个小时都可以。我做的是狗血PBMC，刺激12小时后细胞有成棉絮状，估计刺激时间太长。有的文献上说BFA和Monensin在刺激过程的最后4-5小时才加进去，孵育过久对细胞的活性有影响。不知道ebioscience 加16个小时是怎么解释。
有没有战友用过这种试剂盒，能否提供一个比较理想的刺激时间？

niwanmao

建议按照你要检测的指标，参考一下人的刺激方案：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum ... id=716&pid=1061

sqt

不过我的说明书上写的是Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (40.5 uM), Ionomycin (670 uM), Brefeldin A (5.3 mM), Monensin (1 mM) in Ethanol (500X).不是以质量计的

sqt

Formulation: Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (40.5 uM), Ionomycin (670 uM), Brefeldin A (5.3 mM), Monensin (1 mM) in Ethanol (500X)  说明书上的成分使用摩尔数来标的。

niwanmao

sqt 发表于 2014-5-19 14:33
Formulation: Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (40.5 uM), Ionomycin (670 uM), Brefeldin A (5.3 mM), Mo ...

那就换算嘛。
PMA分子量： 616.83
Ionomycin分子量： 709.00
Brefeldin A分子量：280.36
Monensin分子量：670.871

sqt

请问版主，我如果先染表面标记然后破膜固定液过夜大概7-8个小时可不可行？这样荧光会衰减吗？

niwanmao

sqt 发表于 2014-5-19 21:59
请问版主，我如果先染表面标记然后破膜固定液过夜大概7-8个小时可不可行？这样荧光会衰减吗？ ...

最好当然是直接做完。实在不行，可以先染表面，加固定成份过夜，第二天进行破膜，染胞内因子。

dianalisa

楼主我跟你用的一样的试剂，你最后加了多少，500x，是不是最后只要终浓度是2ul/ml就可以了，还用计算每样加的量么，而且是用什么稀释的，稀释500倍的意思是先把药品稀释500倍再使用还是保证最后样品的终浓度是2ul/ml

trista

请问楼主的问题解决了吗？我是科研小白，一样用ebioscience 的 cell stimulation cocktail(plus protein transport inhibitors)混合刺激剂。我使用的是C57小鼠的脾细胞，刺激4小时，连续2次都没有流式都没有检测到细胞因子，求解呀？

trista

dianalisa 发表于 2015-12-10 21:56
**** 作者被禁止或删除 内容自动屏蔽 ****

比如一个6孔板，每孔2ml，加入4ul就是1X的浓度了