流式电压

futiger · 发表于 2014-5-16 23:21:36

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初来乍到，刚开始接触流式，做外周血细胞流式检测，我用Ficoll分离出来的pbmc，用的是贝克曼xl机器，请大虾帮我看看图的问题，

niwanmao · 发表于 2014-5-17 08:11:17

第二幅图细胞死了吧

futiger · 发表于 2014-5-19 20:59:35

niwanmao 发表于 2014-5-17 08:11
第二幅图细胞死了吧

第一幅图是没有加抗体走出来的，是pbmc中的非贴壁细胞应该以T和淋巴细胞为主，走出来的图形感觉没有那种别人做出来的典型的三团细胞，第二幅图是同样的细胞加了CD3CD56双标抗体后走出来的图，不太清楚怎么解释，劳烦倪老师给指点下

niwanmao · 发表于 2014-5-19 21:53:49

futiger 发表于 2014-5-19 20:59
第一幅图是没有加抗体走出来的，是pbmc中的非贴壁细胞应该以T和淋巴细胞为主，走出来的图形感觉没有那种 ...

加了抗体应该不会影响FSC和SSC的，我觉得可能你处理的时候细胞被你处理死了。

futiger · 发表于 2014-5-21 22:03:49

niwanmao 发表于 2014-5-19 21:53
加了抗体应该不会影响FSC和SSC的，我觉得可能你处理的时候细胞被你处理死了。 ...

哦，明白了，我再做一次看看

futiger · 发表于 2014-5-21 22:23:39

今天又做了一次，前三个图的电压有差别但是是一个标本，里面能体现出两群细胞，最后一个图片是另外一个标本，里面出现的只有一群细胞，倪老师您看下我分析的对不呵呵，还有FL1和FL2的图，总有一个尾巴是什么原因啊？

niwanmao · 发表于 2014-5-22 19:55:18

futiger 发表于 2014-5-21 22:23
今天又做了一次，前三个图的电压有差别但是是一个标本，里面能体现出两群细胞，最后一个图片是另外一个标本 ...

其实你这里几幅图出现的都是死细胞，最后一幅甚至全部都是碎片了。估计你处理过程中出什么问题了。你的离心速度是多少？几分钟？你可以在染色前、染色后、上机前等时间点可以显微镜下看看细胞形态是否完整。

futiger · 发表于 2014-5-25 09:17:43

niwanmao 发表于 2014-5-22 19:55
其实你这里几幅图出现的都是死细胞，最后一幅甚至全部都是碎片了。估计你处理过程中出什么问题了。你的离 ...

可能是分离的时候出现的问题我再试试红细胞裂解液，多谢倪老师

futiger · 发表于 2014-6-4 22:40:28

本帖最后由 futiger 于 2014-6-4 22:43 编辑

150g离心，5分钟这是标完以后的，感觉fl2总是有一些细胞贴在坐标轴上，倪老师您再给看看

futiger · 发表于 2014-6-5 23:02:35

晚上用细胞裂解液又做了一次同一样本，电压条件不同，您看那个好一点啊

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[图片] 流式电压