有关脾脏流式图

zhangminli

请高手帮忙，最近做脾细胞的流式，遇到问题。实验步骤为取脾--研磨---裂解红细胞---滤网过滤--制备的单细胞悬液上流式检测。上流式检测时以FSC 和 SSC为 横轴和纵轴。以所有细胞为P1(门1)，以体积较大，颗粒较少的MNC为P2（门2）.  以下图一为正确的图，图2 是我做的，感觉多出来一个群，已在图3 中用三角形标出。请问那个是什么东西。是红细胞没裂解好，还是什么？谢谢了。
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niwanmao

感觉你可能圈的有点大，因为分界欠清，建议反设门圈P2试试。<br />
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至于三角形门内的，可能是一些实体组织细胞，也可能是淋巴获取时信号异常产生的拖尾，这可以通过淋巴细胞相关标记鉴别。

zhangminli

niwanmao 发表于 2014-6-4 07:05
感觉你可能圈的有点大，因为分界欠清，建议反设门圈P2试试。

好的 下次反圈门试试。
麻烦问下  
实体组织细胞是什么细胞？
因为有个老师带我做两次了，老师做就没有那个奇怪的群，我自己做就会出现。
如果是信号异常产生的拖尾，有避免的方法吗？
如果是实体组织细胞，有什么方法可以避免？

zhangminli

niwanmao 发表于 2014-6-4 07:05
感觉你可能圈的有点大，因为分界欠清，建议反设门圈P2试试。

非常感谢您的回复。

niwanmao

zhangminli 发表于 2014-6-4 08:13
好的 下次反圈门试试。
麻烦问下  
实体组织细胞是什么细胞？

你那个老师带你做的图是否可以传上来对比一下。
实体组织细胞是指脾脏本身的细胞等等非造血细胞。

zhangminli

niwanmao 发表于 2014-6-4 12:24
你那个老师带你做的图是否可以传上来对比一下。
实体组织细胞是指脾脏本身的细胞等等非造血细胞。 ...

第一个图就是老师带着做的呢

zhangminli

niwanmao 发表于 2014-6-4 12:24
你那个老师带你做的图是否可以传上来对比一下。
实体组织细胞是指脾脏本身的细胞等等非造血细胞。 ...

还想请教实验操作过程中的问题。
我每次用红细胞裂解液裂解红细胞，离心后还是有好多红的沉淀，用的是商品化的碧云天的。有什么别的牌子的好的红细胞裂解液可以推荐的，或者是有什么办法？

niwanmao

zhangminli 发表于 2014-6-4 15:23
还想请教实验操作过程中的问题。
我每次用红细胞裂解液裂解红细胞，离心后还是有好多红的沉淀，用的是商 ...

第一个图是BD FACS Calibur机器上做的，第二图可能是Canto II或Aria等机型上做的，机器不同。按道理应该分布不会相差这么大，但由于：
1、标本处理。
2、仪器管路是否存在堵塞。
等等因素的差异，所以造成你们最后结果的差别。

如果按照你的描述，最后有很多红色沉淀，说明红细胞裂解不好，可能你购买的裂解液对小鼠脾脏红细胞效果欠佳吧，你找找其它针对小鼠的红细胞裂解液看看，例如ebioscience的：http://media.ebioscience.com/dat ... lood-cell-lysis.pdf

fernazy

话说我用的BD的裂解液也不是很好，直接用了人红细胞裂解液，常温裂解10分钟效果就很好了

zhangminli

niwanmao 发表于 2014-6-4 20:21
第一个图是BD FACS Calibur机器上做的，第二图可能是Canto II或Aria等机型上做的，机器不同。按道理应该 ...

非常感谢，操作过程我再好好请教请教带我的老师。