不能理解的图

lin850424 · 发表于 2014-6-7 07:57:11

我用cy5标记的miRNA转染悬浮细胞，按常理其转染效率是很低的顶多也就百分之一二十，但此图很难让人理解啊第二，算上cy5我用的是5色标记法，但同样空白调好电压的情况下，出现了图3图4的问题：即1；转染效率难以相信的高，2：第三四六个图为什么会有分群的细胞，而且不再阴性区，（图3是空白，图4仅有cy5染色），没办法我以为是细胞形态变化了，遂又以图4的样本调电压，结果上5色的样本后细胞都压线了，此图没上。

niwanmao · 发表于 2014-6-7 08:29:50

设门的对照没有，所以我觉得你cy5的设门应该按照分群来设门，所以估计30％左右差不多了。

至于后面两个图的分群，我觉得很正常啊。

lin850424 · 发表于 2014-6-8 12:47:58

niwanmao 发表于 2014-6-7 08:29
设门的对照没有，所以我觉得你cy5的设门应该按照分群来设门，所以估计30％左右差不多了。

至于后面两个图 ...

设门的对照不就应该是空白对照吗？第二幅图就是空白对照啊！
后面这两个图，都是同一批细胞，图三是空白对照，未加任何刺激，图四就加了cy-5标记的mirna和转染试剂，为什么会出现细胞分群呢（没加7AAD燃料啊），那图四的7-AAD的门都要向外划到10*4的位置吗？请倪老师指教谢谢。

niwanmao · 发表于 2014-6-8 12:54:59

lin850424 发表于 2014-6-8 12:47
设门的对照不就应该是空白对照吗？第二幅图就是空白对照啊！
后面这两个图，都是同一批细胞，图三是空白 ...

设门的对照应该是FMO对照。空白对照是用来初步调节电压的。

lin850424 · 发表于 2014-6-8 13:15:22

图一图二，就只有cy5一个染色，空白不就是对照了吗？
如果是后面两个图您说用FMO我还可以理解，但后面两个图7AAD 和PE是凋亡试剂染色，我之前做过四色的FITC和PI凋亡，您说不需要FMO的啊！

niwanmao · 发表于 2014-6-8 14:27:06

lin850424 发表于 2014-6-8 13:15
图一图二，就只有cy5一个染色，空白不就是对照了吗？
如果是后面两个图您说用FMO我还可以理解，但后面两个 ...

我的意思是cy5的设门有问题，因为cy5是你转染的东西，没法找到FMO，所以我建议你利用它分群清楚的特点设门，而不是按照空白对照设。
如下图：

至于后面的凋亡分群很正常。

lin850424 · 发表于 2014-6-8 14:48:58

niwanmao 发表于 2014-6-8 14:27
我的意思是cy5的设门有问题，因为cy5是你转染的东西，没法找到FMO，所以我建议你利用它分群清楚的特点设 ...

哦哦，谢谢倪老师！

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