求助：流式细胞术检测淋巴细胞比例出现两个中心是怎么...

axie1126

大家好，我是做流式的新手。我想检测外周血单个核细胞中一种淋巴细胞的比例，进行了三染，结果FSC-SSC中出现两个中心是怎么回事？请了解的大侠帮忙解答。谢谢
。

niwanmao

不知道你染的是什么标记，是否可以把原始文件放上来，我们可以根据反设门看得更明白。

dragonhzqsmmu

细胞活力的问题？粘连体细胞？之前分析小鼠脾脏细胞的时候就出现过类似的图片，结果老师说是活力的因素分为两群

axie1126

niwanmao 发表于 2014-6-16 19:15
不知道你染的是什么标记，是否可以把原始文件放上来，我们可以根据反设门看得更明白。 ...

APC  PE 和FITC ；这个就是原始的SSC-FSC图了  是其中三个分成两群比较明显的。老师还需要什么图？
我的细胞是人的外周血单个核细胞，提取过后-80℃冻存了两个月，不知道会不会有影响

axie1126

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-16 20:33
细胞活力的问题？粘连体细胞？之前分析小鼠脾脏细胞的时候就出现过类似的图片，结果老师说是活力的因素分为 ...

我的细胞冻存过 不知道会不会与这个有关

dragonhzqsmmu

axie1126 发表于 2014-6-16 21:39
我的细胞冻存过 不知道会不会与这个有关

这个应该影响蛮大的，复苏后有没有37度细胞孵箱放过夜，感觉PBMCs冻存后复苏活力不高

axie1126

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-16 21:44
这个应该影响蛮大的，复苏后有没有37度细胞孵箱放过夜，感觉PBMCs冻存后复苏活力不高 ...

没有呢 复苏完之后 洗了两遍 细胞计数后就开始染色了

axie1126

dragonhzqsmmu 发表于 2014-6-16 21:44
这个应该影响蛮大的，复苏后有没有37度细胞孵箱放过夜，感觉PBMCs冻存后复苏活力不高 ...

请问你们一般复苏PBMCs后一般怎么处理呢？我是第一次做，也是实验室别人以前这样做过。不过她们的是鼠的脾脏细胞，结果还可以。
  

niwanmao

axie1126 发表于 2014-6-16 21:38
APC  PE 和FITC ；这个就是原始的SSC-FSC图了  是其中三个分成两群比较明显的。老师还需要什么图？
我的 ...

冻存过的一般会有影响。
我问的是你用的三个抗体分别是什么？不是问你荧光

axie1126

niwanmao 发表于 2014-6-16 22:07
冻存过的一般会有影响。
我问的是你用的三个抗体分别是什么？不是问你荧光 ...

鼠抗人CD19  CD24 CD38