用96孔板染色的问题

cellprobe

我准备在96孔板里细胞染色。想请教前辈几个问题。

第一：用96孔板做细胞染色，在洗细胞的时候孔和孔之间的样品会交叉污染吗？

第二：在洗去抗体的时候，200ul的buffer洗三次能洗干净吗？

第三：如果最后样品也是放在96孔板里面上机，每个孔细胞的数量不应该超过30万个？我听人说过如果细胞数目太多，细胞在孔底沉淀下来有可能把流式的上样管堵住。

谢谢！

niwanmao

1、孔与孔之间是否会污染，得看你的操作是否小心，如果无法保证，建议还是用流式管。
2、洗三次应该问题不大。
3、没有硬性规定，如果细胞太多会沉淀，但如果设计的比较好的流式细胞仪，会在上样前自动震荡均匀，将沉淀重新打匀。

didi_zhou

如果是常规的96孔板不可能检测太多细胞，你只能放不超过150ul液体，不然插针、震荡、抽吸都可能吧你的样品弄出来，所以你一般只能处理到万级，10万级都难。要不你就用深孔板来做。

cellprobe

我今天用96孔板做的，每个孔上了220ul液体，我不知道液体有没有被弄出来.

chen5030

niwanmao 发表于 2014-6-20 20:33
1、孔与孔之间是否会污染，得看你的操作是否小心，如果无法保证，建议还是用流式管。
2、洗三次应该问题不 ...

1. 请想问一下用96孔板操作的时候细胞离心完是直接甩一下甩掉上清还是用枪头吸？我用甩的甩了几次细胞就变得少了很多。如果用枪头吸上清及加样再用枪头吹打需要大量枪头且比较麻烦，不知道有没有比较方便的操作方法？
2. 另外我们的离心机是PMC-2500，是2500rmp的(离心力是500g)，不能调转速，离心3min时间是否够了？

西风驻东南

chen5030 发表于 2014-7-15 15:42
1. 请想问一下用96孔板操作的时候细胞离心完是直接甩一下甩掉上清还是用枪头吸？我用甩的甩了几次细胞就变 ...

1）用枪头吸；2）还是枪头吸，可以用500ul的96孔板洗，洗液加400ul；3）我们用1200rpm for 8mins at 4 °C

chen5030

西风驻东南 发表于 2014-7-16 09:58
1）用枪头吸；2）还是枪头吸，可以用500ul的96孔板洗，洗液加400ul；3）我们用1200rpm for 8mins at 4 ° ...

谢谢，我们的离心机是那种比较简单的，不能调转速，不同离心机同样的转速离心力可能不一样，我再试下离10min甩还是不行的话就用枪头吸吧。

niwanmao

chen5030 发表于 2014-7-15 15:42
1. 请想问一下用96孔板操作的时候细胞离心完是直接甩一下甩掉上清还是用枪头吸？我用甩的甩了几次细胞就变 ...

用枪头是麻烦，但用枪头相对较好，有的时候，麻烦归麻烦，该做还是得做。

chen5030

niwanmao 发表于 2014-7-16 15:22
用枪头是麻烦，但用枪头相对较好，有的时候，麻烦归麻烦，该做还是得做。 ...

恩，谢谢了！