检测细胞凋亡对照组7-AAD信号上扬

EthanMr

       FITC-Annexin V/7-AAD双染检测NB-4细胞凋亡，两个样品同时做的，染色条件一致。上机检测发现对照组7-AAD信号整体上扬，不知道是什么原因。重新做了一次实验，其它条件不变，换用其它实验室的7-AAD进行染色，结果仍然是对照组7-AAD信号整体上扬（未上图）。不知道各位站友有没有遇到这种情况，是什么原因造成7-AAD信号上扬的呢？

control

drug treated

niwanmao

EthanMr 发表于 2014-6-26 09:54
附上两次实验的结果。第二次实验使用了caspase-3的抑制剂Z-DEVD-fmk，其中control和Z-DEVD-fmk的样本7- ...

嗯，我发现7-AAD信号高的基本上都是FSC偏大的，在临床上FSC大的M3之类白血病也经常会出现各通道荧光非特异性增高的现象，我怀疑跟颗粒度导致的非特异性荧光高有关。

niwanmao

两组细胞的FSC/SSC能不能发上来看看？

EthanMr

niwanmao

EthanMr 发表于 2014-6-23 22:00

是不是第二个图（77.9％）是对照组？那是由于细胞状态欠佳造成非特异性染色过高。

EthanMr

niwanmao 发表于 2014-6-24 19:04
是不是第二个图（77.9％）是对照组？那是由于细胞状态欠佳造成非特异性染色过高。 ...

抱歉没有标清楚，第一个图（98.0%）那个是对照，第二个图是处理组。对照组的状态明明还不错，确有那么高的7-AAD信号，很郁闷。

niwanmao

EthanMr 发表于 2014-6-25 09:03
抱歉没有标清楚，第一个图（98.0%）那个是对照，第二个图是处理组。对照组的状态明明还不错，确有那么高的 ...

有没有FCS原始数据？不至于吧。

EthanMr

niwanmao 发表于 2014-6-25 19:07
有没有FCS原始数据？不至于吧。

第一次实验.rar (1.56 MB, 下载次数: 9)

2014-6-26 09:48 上传

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第二次实验.rar (3 MB, 下载次数: 6)

2014-6-26 09:48 上传

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附上两次实验的结果。第二次实验使用了caspase-3的抑制剂Z-DEVD-fmk，其中control和Z-DEVD-fmk的样本7-AAD信号都比较高，而drug treated和drug+Z-DEVD-fmk的样本7-AAD信号正常。我想问一下第二次实验的结果发文章的话是否可以使用？会不会被认为细胞状态异常？
PS：使用的试剂是BD的FITC-Annexin V、7-AAD。

EthanMr

niwanmao 发表于 2014-6-26 12:42
嗯，我发现7-AAD信号高的基本上都是FSC偏大的，在临床上FSC大的M3之类白血病也经常会出现各通道荧光非特 ...

倪老师，我找到了很久以前做的实验结果，同样是NB-4细胞，对照组的7-AAD染色确很正常，所以我觉得应该不是NB-4这个细胞系的问题。

control

control                     

drug

                              drug treated

以前的实验数据.rar (298.22 KB, 下载次数: 6)

2014-6-27 10:36 上传

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niwanmao

EthanMr 发表于 2014-06-27 10:36:18

                               
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倪老师，我找到了很久以前做的实验结果，同样是NB-4细胞，对照组的7-AAD染色确很正常，所以我觉得应该不是

我的意思是指对照组状态好，细胞偏大颗粒偏多，所以非特异荧光偏强，而用药物处理后，fsc变小了，非特异荧光也减弱了。你有没有发现你这个以前的结果中，虽然十字门位置可以统一，但还是看得出来control组的非特异荧光强一些