样品浓度递减，会突然就检不出了吗

wsnxbdr

样品是纯细菌的菌液，稀释2000倍后可以正常检出，但稀释5000倍后就基本检不出什么了。然后我配了一个梯度，比例上是1:0.9:0.8。。。：0.2:0.1。这个数是相对于稀释2000倍样品的，也就是这个梯度相当于从稀释2000倍到稀释了20000倍。前5个都还算正常，也是递减的，即差不多是1.0:0.9:0.8到比0.6的关系，但第6个就不到0.5倍了，只有约0.2，第7个开始往后，就都成了基本检不出的情况了（就是只是很少的点，也没有递减的变化）。

请问大家有碰到过类似的情况吗，这个现象正不正常？

仪器应该是有一个相对准确的检测浓度范围的，但在这个范围的两类就会发生准确度的突变吗？

niwanmao

管路通畅么？

dragonhzqsmmu

稀释5000倍后1ml细菌悬液中大概浓度多少？是否太低，需要调高流速才能测出来？

第6个标本的样本检出速度多少？即每秒多少events？

didi_zhou

PMT是有线性范围的，超过线性范围就检测不出或者是不准了，不然怎么做细胞因子要做标准曲线呢。

wsnxbdr

didi_zhou 发表于 2014-6-25 23:51
PMT是有线性范围的，超过线性范围就检测不出或者是不准了，不然怎么做细胞因子要做标准曲线呢。 ...

我感觉您的回答不是我要问的。也可能是我理解错了您的回答。
PMT的线性范围我知道，是说入射光强和输出电流的关系。
我的实验是样品中细菌的个数减少，但染料的浓度不变化，所以单个细胞产生的荧光的光强应该没变化，只是产生荧光的次数减少了。产生荧光的次数不就是仪器记录的细胞个数吗。
我知道这个样品中细胞个数跟检出的细胞个数肯定有一个可信范围，但是在这个范围的两端，尤其是低的一端出现这种突然的变化就很奇怪了。。。

chymanhz

听上去挺奇怪的，按理说应该就是只要时间长就可以检测出来，你的细菌荧光会不会随时间淬灭，导致时间长了就没有荧光了。

haven_t

试下反过来从低浓度开始怎样

wsnxbdr

niwanmao 发表于 2014-6-25 19:07
管路通畅么？

我不知道怎么评判管路是否通畅，即使不很通畅，觉得也不应该出现浓度下降就突然检不出的情况

niwanmao

wsnxbdr 发表于 2014-6-26 17:48
我不知道怎么评判管路是否通畅，即使不很通畅，觉得也不应该出现浓度下降就突然检不出的情况 ...

如果管路不通畅，从time为横坐标的图上可以看出那段时间细胞数量很少或偏离，就是意味着那段时间会检测不到信号。

小灰

1.你的仪器是什么仪器？多少bit？bit值代表分辨率，可能是bit值低了
2.仪器是什么上样模式？正压吸的体积大，负压上样相对体积的。如果是负压上样，那么吸取的体积大致一样，但是所含细胞数少了，有可能会出现不能出结果的现象
3.稀释后样品体积有没有增加？如果增加的话，抗体是否相应增加？没增加可能出现染色不足导致不出结果
4.流式仪有个丢失率问题的，细胞浓度太稀会发生丢失现象。基本大家比的是每秒最大检测速度，但是没写最小细胞检测浓度