抗体与细胞结合后的分布问题

chen5030

在实验中遇到一个问题，细胞在加入一抗和2抗后最多只有50%左右的细胞是阳性，不管一抗加多少，加的多最我阳性区的峰变的很宽，一开始以为是不是有一半细胞的表面抗原表达的不好，后来看到一个几贴子说流式检测也有一个下限，大概是750个flurorescein，于是就冒出了一个是不是抗原丰度太低，且抗原抗体结合时每个细胞结合的量不一样（一抗结合或二抗结合），有一部分结合的抗体太少导致达不到检测下限，被认为是阴性区。所以有以下2个问题：
1. 一抗与细胞孵育后，每个细胞上结合的一抗是比较均一的还是呈现一个正态分布呢？
2. 加入二抗后二抗与一抗结合又是一个怎样的分布呢？

niwanmao

对结果有怀疑，可以参考一下相关文献。

另外，抗体滴度也是一个很重要的原因，太少了不行，太多了，也容易产生高CV的情况。