细胞核内蛋白，用间标抗体做流式，求前辈们给个指导！

續、寫。

我在做一个细胞核内转绿因子，有这个转绿因子的一抗（santa的），二抗是抗一抗的Alex 488。因为目标蛋白在核内，我就用了ebioscience的核内染色固定破膜kit完成整套流程，发现只加二抗的对照背景特别高。觉得肯定是非特异性结合，想到要不要封闭？但是怎么封闭是个问题，所以请教一下有做过的前辈指导一下。感激不尽！！

niwanmao

建议换一种破膜剂。

續、寫。

niwanmao 发表于 2014-7-19 07:54
建议换一种破膜剂。

谢谢倪老师的解答，做核内因子比较好的应该是ebio的，不知道该换什么？

niwanmao

續、寫。 发表于 2014-7-19 12:39
谢谢倪老师的解答，做核内因子比较好的应该是ebio的，不知道该换什么？

其它选择也很多，不过如果你以前做的还不错，那就继续用这个吧。

关于二抗引起的非特异性荧光偏高，我想了想，感觉更可能是这种二抗与检测组织交叉反应比较明显，建议选择一种只与一抗反应、却不会与检测组织发生交叉反应的二抗。