live/dead染料设门显示的细胞活性为什么是反的

33flower

请教各位老师，我收集了小鼠抗凝血，裂解红细胞后，将白细胞进行live/dead染料染色进行流式检测，结果发现sytox green阳性的死细胞，R9设门后反应在FSC/SSC散点图上，出现的竟然是粒细胞，单核细胞与淋巴细胞。而将resorufin阳性的活细胞，R10设门后反应在FSC/SSC散点图上，出现的竟然是细胞碎片和死细胞。为什么会这样？请各位老师解答。谢谢

niwanmao

sytox和resorufin的通道有没有设置错？截一张通道荧光染料设置的图看看。

33flower

niwanmao 发表于 2014-7-22 19:31
sytox和resorufin的通道有没有设置错？截一张通道荧光染料设置的图看看。

倪老师，这是通道设置的截图

niwanmao

33flower 发表于 2014-7-23 15:23
倪老师，这是通道设置的截图

我建议你调节两样东西：
1、将FL1－FL2调节为1％以内。
2、将FL1调小，直至左上那群syto阳性的细胞降到阴性区域。

bingbingyan0714

倪老师，记得之前您之前发过一个帖子，荧光染料和live/dead染料一起染了以后可以在同一X轴上看，这样可以吗？还有除粘连体是在live/dead前好些还是后面好些？可否在此加上那个帖子链接？不胜感激！＠niwanmao

niwanmao

bingbingyan0714 发表于 2019-2-14 22:25
倪老师，记得之前您之前发过一个帖子，荧光染料和live/dead染料一起染了以后可以在同一X轴上看，这样可以吗 ...

荧光染料和live/dead放在一个通道的话，就说明这个荧光染料是作为排除性染料，那是可以的。
至于粘连体先设门还是live/dead先设门，个人习惯不同，只要是逐级设门，谁前谁后无所谓。