Th17检测

zxxfighting

倪老师，您能帮我看看我做的图么？这是Th17细胞
感觉IL-17总是染不上，我是用破膜剂100ul+IL-17室温避光孵育1h




另外一个问题是，下面那部分应该是淋巴细胞？
我用的是PMA+离子霉素+莫能霉素刺激4.5小时，收集细胞时只收集了悬浮的淋巴细胞。
第一幅图是没有经过固定破膜处理的细胞的分群状态
第二幅图是经过固定破膜处理的细胞。

niwanmao

首先说第二个问题，如果CD4高表达反设门后，显示的位置在P1位置，那么就是淋巴细胞。

至于IL17染不上的问题，可能还是得从破膜剂、抗体两方面进行排除。

zxxfighting

niwanmao 发表于 2014-7-26 22:20
首先说第二个问题，如果CD4高表达反设门后，显示的位置在P1位置，那么就是淋巴细胞。

至于IL17染不上的问 ...

倪老师，我发现我的CD4好像都没有染上，我在CD4+CD25同型+CD127同型里找到的一团分出来的细胞，发现反应在空白孔里面是分散的。所以我推测是不是CD4都没有染上。我是4℃，避光1h，并且这个CD4-FITC也用来做了Treg表面染色的，效果还可以。这是怎么回事呢？另外，一般用PMA+离子霉素+莫能霉素处理4h后，CD4+比例（正常情况下）大概能达到多少呢？谢谢老师！

zxxfighting

zxxfighting 发表于 2014-7-29 07:45
倪老师，我发现我的CD4好像都没有染上，我在CD4+CD25同型+CD127同型里找到的一团分出来的细胞，发现反应 ...

经过老师的确认，CD4应该还是染上了，还是IL-17没有染上。我会从抗体和破膜剂方面在找找原因。谢谢倪老师！

niwanmao

zxxfighting 发表于 2014-7-29 16:58
经过老师的确认，CD4应该还是染上了，还是IL-17没有染上。我会从抗体和破膜剂方面在找找原因。谢谢倪老师 ...

好的。你先从做的好的人那边借点没问题的破膜剂，先排除破膜剂问题看看。一般推荐invitrogen或者beckman。