大鼠外周血免疫表型探索，请各位给挑挑毛病

zark_00

试剂到了一批，先做了次双panel 测 CD45 CD3 CD4 CD8a CD45RA（B cell） CD161a(NK),  具体为 CD45 CD3 CD4 CD8a 一组，CD45 CD3 CD45RA CD161a一组。每组有Isotype cocktail 对照 调电压，有单染调节补偿，最后有3个不同动物的样本。加抗体孵育前，均+入纯化小鼠抗大鼠CD32阻断（<1ug/1百万个细胞）。结果如下
请问倪老师和其他战友，我的结果中是否有严重的非特异性结合，看上去是否补偿有问题，设门策略是否正确，谢谢。我感觉CD3 (T）比例偏低，而CD45RA和CD161a都偏高（B和NK),

zark_00

倪老师和各位战友都在过节么，泪奔啊~呼唤大神~

探索课题本来不应该搞“日清”的，应该给足够的时间去解决问题（如果有的话），限期完成不就行了么。天天搞“日清”汇报，弄得我们这些实验条件本来就需要探索的人，实验过程弄得像打满补丁的衣服一样。跟做那些有标准方法填空式无需多探索，只需严格follow略有改动的实验的兄弟一比，“能力不够嘛，你无法得到我的信任嘛”出了问题就是这个态度。。。。。。我儿子上大学要敢学生物，找工作找生物类的，我打断他的腿~

niwanmao

差不多啊。只是CD161a的分群有点怪异，你看看相关文献的分群是否如此？

zark_00

niwanmao 发表于 2014-8-3 18:47
差不多啊。只是CD161a的分群有点怪异，你看看相关文献的分群是否如此？

谢谢 倪老师。您指的161a 分群怪异，能具体说说么。至今我找不到做大鼠外周血CD45 CD3 CD4 CD8a CD45RA CD161a的文献，今晚找找有没有以淋巴细胞亚群为题目的，猴子的我有，鼠的没有彻底找过

zark_00

niwanmao 发表于 2014-8-3 18:47
差不多啊。只是CD161a的分群有点怪异，你看看相关文献的分群是否如此？

我这个，CD3+ (pan T） 才30%-40%，CD3-CD161a+(NK) 10-20%,CD3-CD45RA(10%-20%),外周血淋巴细胞中不应该是Pan T 为主要（60%+）B10%~和NK小于10%的么，按猴的经验

niwanmao

zark_00 发表于 2014-8-3 20:22
我这个，CD3+ (pan T） 才30%-40%，CD3-CD161a+(NK) 10-20%,CD3-CD45RA(10%-20%),外周血淋巴细胞中不应该 ...

比例不是主要问题，可能是因为你FSC/SSC散点图中细胞碎片多的缘故。

RIVA

我想问一下，CD3+161a dim部分属于阳性么？

zark_00

RIVA 发表于 2014-8-4 10:35
我想问一下，CD3+161a dim部分属于阳性么？

我就是确定不了啊。你看161a的1,2,3图，CD3-CD161a-区域，细胞分群每图都不一样。我在想是否是补偿做得不好，但是补偿都是按均值补偿做的，均值都尽量调到一致了。

RIVA

zark_00 发表于 2014-8-4 12:51
我就是确定不了啊。你看161a的1,2,3图，CD3-CD161a-区域，细胞分群每图都不一样。我在想是否是补偿做得 ...

我认为你得补偿没有问题，你把原始数据传上来吧，咱们一起分析看看~

RIVA

RIVA 发表于 2014-8-4 15:51
我认为你得补偿没有问题，你把原始数据传上来吧，咱们一起分析看看~

CD161A是不是大部分表达在CD56啊，如果你想看少部分表达在T中的比例，是不是就是用1-CD56中CD161A的比例就可以了呢？