AV-PE和7-AAD双染法检测凋亡求助

桃小丁

我用AV-PE和7-AAD双染法检测不同浓度药物（中药）处理后肿瘤细胞（贴壁细胞）的凋亡情况，发现用药后细胞自发荧光，并且PE染色无法分群，请问各位战友该如何处理？用的是BD的试剂盒，是换种试剂盒？并且如果结果可靠的话，凋亡率有点儿夸张，镜下看是没这么夸张的，不知如何是好~~~~{:soso_e154:}{:soso_e154:}{:soso_e154:}附上数据压缩包~~~

niwanmao

你这些数据是用C6获取的，所以优点就是可以拖动缩放查看。
从结果看，后面几组加药的AV PE基本上都比较一致，但0孔的AV PE位置偏低，可能跟药物处理有关吧。所以考虑再三，我觉得还是应该以后面的加药组AV PE位置为准。

结果查看：https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=NjM4MHwwNzdlZDg2MnwxNzQwMjgyOTAxfDB8

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-8-4 22:01
你这些数据是用C6获取的，所以优点就是可以拖动缩放查看。
从结果看，后面几组加药的AV PE基本上都比较一致 ...

谢谢倪老师！！！但这样的话0mg组显得细胞特别少，这组我可以单独用十字画门吗？因为用了药以后细胞有自发荧光，所以群体整体是往右上移的，在收集细胞的时候可以明显看到细胞染上药物颜色，并且不同浓度用药组未染色组的mean FL2\FL3值也明显比0mg未用药组的大。
还有想请问下倪老师后面用药组的荧光补偿大概是多少呢？无论我怎么调补偿PE总是无法分群。感谢倪老师~~~

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-8-4 22:01
你这些数据是用C6获取的，所以优点就是可以拖动缩放查看。
从结果看，后面几组加药的AV PE基本上都比较一致 ...

倪老师，我看您PE选的是FL3通道，7-AAD选的是FL2通道，可是仪器工程师告诉我的是相反的，不知您这样分析是因为什么呢？

chymanhz

桃小丁 发表于 2014-8-5 11:06
倪老师，我看您PE选的是FL3通道，7-AAD选的是FL2通道，可是仪器工程师告诉我的是相反的，不知您这样分析 ...

没看数据，如果仪器是C6的话，不排除滤光片插拔换过位置，它的2个位置可以互换（不是严格意义上的）

niwanmao

桃小丁 发表于 2014-8-5 11:06
倪老师，我看您PE选的是FL3通道，7-AAD选的是FL2通道，可是仪器工程师告诉我的是相反的，不知您这样分析 ...

你看反了，7-AAD是FL3，PE是FL2。

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-8-5 20:59
你看反了，7-AAD是FL3，PE是FL2。

对的，工程师告诉我的也是7-AAD是FL3，PE是FL2检测，可是您给我分析的报告中横坐标用的是FL3，纵坐标用的是FL2，咱们不是一般都是横坐标代表AV-PE,纵坐标代表7-AAD的吗？

桃小丁

chymanhz 发表于 2014-8-5 20:12
没看数据，如果仪器是C6的话，不排除滤光片插拔换过位置，它的2个位置可以互换（不是严格意义上的） ...

难道真的是这样吗？我用PI检测周期的时候用FL3和FL2通道都能测出来~~~

niwanmao

桃小丁 发表于 2014-8-5 22:14
对的，工程师告诉我的也是7-AAD是FL3，PE是FL2检测，可是您给我分析的报告中横坐标用的是FL3，纵坐标用的 ...

横坐标和纵坐标用哪个通道是无所谓的：）谁规定一定要横坐标用AV-PE的，呵呵

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-8-5 22:23
横坐标和纵坐标用哪个通道是无所谓的：）谁规定一定要横坐标用AV-PE的，呵呵 ...

我思维定式了～～～那这样左上象限代表早期凋亡～～～那不是都么有细胞～～～