请教关于流式检测CD4CD25FoxP3

晓玮1991

请教各位师长、学姐，我在做小鼠脾细胞的调节T细胞，抗体是BD的，但流式检测CD4+FoxP3 有4%左右，CD4+CD25+有10%左右，但CD4CD25FoxP3 只有1%，做流式的老师说这是不共表达，想请教大家 这问题是出在哪儿了？

niwanmao

你的问题我没看懂，为什么写着“做流式的老师说这是不共表达”？

RIVA

第一：问题表述不太清楚，要不把分析好的图贴上来，对照着说。
第二：你的破膜用的是什么？表达量不高很有可能是破膜没破好~
第三：如果是步骤问题，最好把操作步骤写上。

钢蛋儿

楼主的问题我深有体会，测出来CD25和Foxp3双阳的比例很低，
我觉得
一是和补偿调节有关，
二是nTreg本来就少，那再怎么调机器也不行啦~~

田田

钢蛋儿 发表于 2014-8-9 00:16
楼主的问题我深有体会，测出来CD25和Foxp3双阳的比例很低，
我觉得
一是和补偿调节有关，

请问测treg的时候可以不标记CD25吗？只标记CD4和FOXP3

niwanmao

田田 发表于 2014-10-17 20:18
请问测treg的时候可以不标记CD25吗？只标记CD4和FOXP3

不行。

congou

我用过bioscience的kit来做小鼠全脾细胞，检测下来还可以啊，FOXP3可以看到明显的一群阳性细胞

味海医心

niwanmao 发表于 2014-10-17 20:31
不行。

倪老师，请教为什么不标记CD25不行呢？

小憨

我常用的四色方案是CD3和CD4做散点图，找出CD4+ T细胞圈门再用CD25和Foxp3、或CD25和CD127做散点图，双阳性（CD25和Foxp3）部分或CD25单阳（CD25和CD127）部分就是Treg啦。
我觉得CD4、CD25、CD127和Foxp3的四色方案是不是更好？可以请问一下专家（CD3可以免了）
因为Foxp3不仅在胞内，而且在核内，所以破膜的的步骤真的很关键。

niwanmao

味海医心 发表于 2015-4-7 16:25
倪老师，请教为什么不标记CD25不行呢？

经典的组合是CD4、CD25、foxP3，现在临床上用的基本上CD4、CD25、CD127。
Treg的特点如此，尽管光用CD4、foxP3也能圈foxP3阳性的，而且比例接近，但是总归没有按照特点来。