请问检测CD4和CD8细胞的时候，需要同时标记CD3吗？

田田

如题，本人要做大鼠外周血和脾细胞的流式，打算检测CD4，CD8和Treg细胞（CD4 CD25 FOXP3）。目前有几个问题：
1、请问需要同时标记CD3吗？
2、Treg细胞检测时需要标记3个抗体吗？可否只标记CD4 CD25 或CD4 FOXP3？
从未做过流式，望大家多多帮助，给予解答~谢谢了

niwanmao

如果你要计算CD4＋细胞比例，那么要加CD3.
Treg的问题在另一个帖子中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3736-1-1.html）已经回答，CD25不能少。

田田

niwanmao 发表于 2014-10-17 20:44
如果你要计算CD4＋细胞比例，那么要加CD3.
Treg的问题在另一个帖子中（http://www.flowcyto.cn/bbs/thread- ...

我发每个帖子都能见到您，真是太谢谢了~

我是想测CD4/CD8……

niwanmao

田田 发表于 2014-10-17 20:54
我发每个帖子都能见到您，真是太谢谢了~

我是想测CD4/CD8……

加上CD3，会使你的结果更准确。

xjwl8587

我也来参加一下讨论。建议你一定要加CD3以及能区分死细胞和活细胞的dye。你的这个staining是interacellular staining。你在fix和perm的过程中会有很多死细胞，这些死细胞到最后都是false positive。如果最后你想发一篇好的paper而且碰到FACS的行家，他们肯定会问你你有没有排除死细胞。你可以试一试这个false positive很多

田田

xjwl8587 发表于 2014-10-24 18:30
我也来参加一下讨论。建议你一定要加CD3以及能区分死细胞和活细胞的dye。你的这个staining是interacellular ...

谢谢。现在马上要做实验了，请问检测时是同时标记CD3 CD4 CD8三种抗体吗？
还是分别检测CD3CD4和CD3CD8？

niwanmao

田田 发表于 2015-1-16 12:35
谢谢。现在马上要做实验了，请问检测时是同时标记CD3 CD4 CD8三种抗体吗？
还是分别检测CD3CD4和CD3CD8？ ...

同时标记最好。

xjwl8587

田田 发表于 2015-1-16 12:35
谢谢。现在马上要做实验了，请问检测时是同时标记CD3 CD4 CD8三种抗体吗？
还是分别检测CD3CD4和CD3CD8？ ...

不好意思。才看到。我也建议同时标记。

culturelily

xjwl8587 发表于 2014-10-24 18:30
我也来参加一下讨论。建议你一定要加CD3以及能区分死细胞和活细胞的dye。你的这个staining是interacellular ...

但是，内染色加Live/dead dye是在fix/perm之前，跟表面因子一起染的

niwanmao

culturelily 发表于 2015-4-7 09:44
但是，内染色加Live/dead dye是在fix/perm之前，跟表面因子一起染的

fix和perm时一般不太会死细胞的：）