出现拖尾情况

piaolingkl

大家好，我用的是淋巴组织做的流式，用percp标记CD3，PE标记CD8，PITC标记CD4，现在发现都存在拖尾情况，想请教下大家，这种情况是因为封闭非特异抗原没做好？电压没调呢？还是其他什么导致的，多谢各位{:soso_e183:}CD3单阳管子

niwanmao

这些非特异性信号有几种可能：
1、非特异性荧光。
2、电子信号干扰。
3、死细胞。
一般位于FL2和FL1散点图对角线上。
不管何种引起，像你图形上这种比例是可以接受的，设门时不要全部为0，而是应该设在大部分细胞的边缘处（如下图），这些对角线信号的比例允许在1％以内。

piaolingkl

niwanmao 发表于 2014-11-2 10:11
这些非特异性信号有几种可能：
1、非特异性荧光。
2、电子信号干扰。

谢谢老师，还有个问题没搞明白，对于第一步选取淋巴细胞这一步骤，我有两种理解方式和相应的选取方式，但两者其实是相互矛盾的，想知道哪个地方我理解错了，一种是选取细胞密集区，毕竟相同的细胞它的细胞大小和细胞内部结构应该差不多，所以FSC和SSC所在区域应该接近，那我就先用一个选取细胞密集区后，把这个门应用到全部，另一种是选取死细胞外的所有细胞，因为我取的是淋巴组织，而CD3是T细胞特有的抗原标记物，那这样只有T细胞会有荧光信号，其他类型的细胞没有与CD3抗体结合，那应该没有荧光信号，所有流式图上除死细胞区外所有的细胞都可以选取。如果不是要做出好看的图片用，而且像得到数据用来进行统计分析，哪种得出的数据更可靠呢，谢谢老师

niwanmao

piaolingkl 发表于 2014-11-2 13:12
谢谢老师，还有个问题没搞明白，对于第一步选取淋巴细胞这一步骤，我有两种理解方式和相应的选取方式，但 ...

选取淋巴细胞区域，用顶楼那样设门更好。

piaolingkl

niwanmao 发表于 2014-11-2 19:34
选取淋巴细胞区域，用顶楼那样设门更好。

:handshak谢谢老师