分析细胞周期结果，提几点疑问求解答~~

普林斯_顿

很高兴加入这个论坛可以交流学习。作为新手拿着最基本的protocol做了一次细胞周期。结果是不太理想，希望找到原因，也供其他人参考避免。

我实验目的是测试一种miRNA对细胞周期的影响，结果见图（上图未处理，下图为转染miRNA）




过程：待细胞生长对数期铺板，24小时后转染，24小时后收细胞，进行固定染色上机。


Q1：图中为什么有黄色的部分，是细胞碎片？异倍体细胞？凋亡？可以避免吗？此次结果如何分析{:soso_e149:}

Q2：这样的实验需要进行细胞周期同步化以后做吗？

Q3：收集细胞时候，消化细胞前需要把之前养细胞的培养基和洗细胞的PBS也收集起来离心吗?

Q4: 固定用的70%乙醇到底是用去离子水呢？还是PBS？（2种版本都见过）

Q5：PI染色后，上机前需要用300目尼龙网过滤减少粘连的细胞吗？

先谢谢了，周一下午就再收细胞了，希望可以结果好点点~{:soso_e116:}

niwanmao

Q1：我估计你用了自动分析模式，这种分析模式是不准的，要改manual analysis。黄色峰是很漂亮的apoptosis峰。
Q2：是否需要同步化后检测，看你们的实验需要。
Q3：培养基离心掉就行了啊。
Q4：70％的乙醇当然用去离子水配制。
Q5：上机前最好过滤，肯定有细胞团块的。

普林斯_顿

niwanmao 发表于 2014-11-10 20:46
Q1：我估计你用了自动分析模式，这种分析模式是不准的，要改manual analysis。黄色峰是很漂亮的apoptosis峰 ...

十分感谢老师的答疑解惑。如果细胞有团块是不是也可能出现apoptosis峰？

燕仔zoe

普林斯_顿 发表于 2014-11-11 11:00
十分感谢老师的答疑解惑。如果细胞有团块是不是也可能出现apoptosis峰？

一般细胞团块是会出现在细胞粘连的区域，或直接堵住进样针

niwanmao

普林斯_顿 发表于 2014-11-11 11:00
十分感谢老师的答疑解惑。如果细胞有团块是不是也可能出现apoptosis峰？

细胞团块不会出现在凋亡峰的位置，会堵管

普林斯_顿

niwanmao 发表于 2014-11-11 19:41
细胞团块不会出现在凋亡峰的位置，会堵管

了解了！细胞碎片会出现凋亡峰位置吗

niwanmao

普林斯_顿 发表于 2014-11-14 10:12
了解了！细胞碎片会出现凋亡峰位置吗

碎片峰会比凋亡峰还要往左去，要小很多。