细胞分群不明显应该怎样分析

桃小丁

请教各位战友，我分别用AV-PE/7-AAD和AV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡，发现细胞分群均不明显，主要是早期凋亡和活细胞分不开，我用的是中药处理细胞（肿瘤细胞系，属贴壁细胞），所以细胞有被染上色。这种情况应该怎么分析呢？附上截图

niwanmao

贴壁细胞还是悬浮细胞？

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-11-24 19:49
贴壁细胞还是悬浮细胞？

贴壁细胞，消化下来其实还好，FSC和SSC散点图圈门的时候基本能达到90%以上的细胞，就是分群不明显，所以我就根据双阴性细胞来画门，但是不知道这样分析发文章的时候被人承认否

niwanmao

桃小丁 发表于 2014-11-24 20:53
贴壁细胞，消化下来其实还好，FSC和SSC散点图圈门的时候基本能达到90%以上的细胞，就是分群不明显，所以 ...

ANNEXIN V不适合染贴壁细胞，至少我到目前为止没看到染的好的贴壁细胞，你是否看到过？

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-11-24 21:04
ANNEXIN V不适合染贴壁细胞，至少我到目前为止没看到染的好的贴壁细胞，你是否看到过？ ...

有些文献上还是有很漂亮的图的，比如这个，贴壁细胞人恶性胶质母细胞瘤U87MG，用的也是BD公司的AV-FITC/PI双染法，我觉得分群非常明显，不过处理的药物不是中药

dragonhzqsmmu

消化酶是否需要改进，LZ是否使用胰酶消化，换用accutase酶试试，可能对于细胞膜的损伤小点
另外刺激的强度和时间是否不足？示范的图片是否刺激较强所以中间状态少？
换caspase活性等测试？

桃小丁

dragonhzqsmmu 发表于 2014-11-25 08:56
消化酶是否需要改进，LZ是否使用胰酶消化，换用accutase酶试试，可能对于细胞膜的损伤小点
另外刺激的强度 ...

我用的是不含EDTA的胰酶，消化时间已经很注意了，另外刺激的强度和时间的话以CCK8的标准来看的话是已经足够了，之前也有用更高浓度的处理后测凋亡，但也是分群不明显，我也是头痛不知道要不要再加一些其他指标测凋亡，那您觉得这样的图别人承认吗？虽然分群不明显，但是我是根据未染色组细胞群所在位置来画门的

桃小丁

桃小丁 发表于 2014-11-25 10:26
我用的是不含EDTA的胰酶，消化时间已经很注意了，另外刺激的强度和时间的话以CCK8的标准来看的话是已经足 ...

另外我测的一些凋亡相关蛋白是有明显趋势的，就是流式这块的图总不好，不知道能不能说明问题

niwanmao

桃小丁 发表于 2014-11-25 10:26
我用的是不含EDTA的胰酶，消化时间已经很注意了，另外刺激的强度和时间的话以CCK8的标准来看的话是已经足 ...

这样的分群图形拿出去发表不是很好。我建议要么换种消化方式（参考你前面发的这个图对应胆文献）重做，要么放弃这个图。

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-11-25 10:36
这样的分群图形拿出去发表不是很好。我建议要么换种消化方式（参考你前面发的这个图对应胆文献）重做，要 ...

那文献里也没提到消化方式，其他的一些文献做的还行的图基本也是用的无EDTA的胰酶，收集下来细胞我是能看到细胞被药物染上了色，您觉得除了消化的原因，有没有可能是因为细胞带上了自发荧光导致分群不明显呢？