CD4+CD25+Tregs与Th17流式检测

农民哥哥

各位老师好！
本人才开始进实验室做实验，想请教一些问题。
取SD大鼠全血流式检测CD4+CD25+Tregs与Th17数量。我只需做好标本，送给实验室的老师检测。

1、CD4+CD25+Tregs不要刺激，需买哪些试剂？有没有合在一起的试剂盒？
2、Th17需刺激，标本要无菌吗？有刺激试剂和染色破膜的试剂（所有试剂）一起的试剂盒吗？哪一种试剂盒效果会好点？
3、染色后需要裂解红细胞后才能上机检测吗？
4、标本的量最少多少？0.1ML 或0.05ML？ 我用采人血2ml用的那种紫色肝素管装标本会有影响吗？
5、哪位大大有详细步骤或教程吗？
请各位老师指点，感激不尽！

niwanmao

1、Treg有kit，可以问问BD、Biolegend、eBioscience等公司。也可能自己买CD4、CD25、CD127（或foxP3）。
2、Th17需刺激，标本无菌，有刺激用的kit，亦可以查上述公司。
3、一般上述标本是先提取PBMC，再培养和刺激的，所以不需要裂红。
4、标本最少量应该是2ml才对，0.1ml没用，中间培养和刺激要死很多的。
5、具体步骤请搜索或翻看科研版块、书籍和资料版块，中间有资料。要学会找。

农民哥哥

niwanmao 发表于 2014-11-25 20:59
1、Treg有kit，可以问问BD、Biolegend、eBioscience等公司。也可能自己买CD4、CD25、CD127（或foxP3）。
2 ...

谢谢倪老师，再请教一下，我不用PBMC,直接用全血作标本可以吗？ 大鼠活体取血一次就只能取上0.2-0.4ML。

niwanmao

农民哥哥 发表于 2014-11-25 22:32
谢谢倪老师，再请教一下，我不用PBMC,直接用全血作标本可以吗？ 大鼠活体取血一次就只能取上0.2-0.4ML。 ...

Treg是可以用全血标记，然后裂解，上机检测，因为不需要刺激。

Th17检测呢，全血也可以试试，但不知道效果是否好，因为红细胞和其它白细胞成份的干扰。