细胞碎片可以发出明显的凋亡峰么？

陈瑞斌

各位老师，同学大家好。小弟正在进行中药对癌前细胞促进凋亡测试。用的仪器BD Accui 6.  试剂 ANNXIN V-FITC/PI.目前得到的结果发现高浓度组药物处理后早期凋亡处出现明显分群，但该群在FSC,SSC中基本处于细胞碎片的位置。请问这种现象正常么？ 该群可否使用？ 是细胞凋亡体积严重缩小导致的正常现象(显微镜下可以看到药物作用后细胞变扁平透明很明显）,还是细胞碎片染上色也可以发出这么强的荧光？ 我实验使用的细胞属于很难消化型的贴壁细胞。消化使用无EDTA的胰酶时间需9min。由于较难消化所以碎片也较多些。但染色分群明显。

niwanmao

huikaimin 发表于 2014-12-1 23:31
在检测细胞凋亡的时候，我一般会在FSC，SSC设置一个门，来去除细胞碎片。而且，根据，FL1，ssc,  以及FL2， ...

参考这个设门：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2186-1-1.html

niwanmao

唉。又是做贴壁细胞的AV-PI。
能不能把门设在FSC大的那群那里看看AV/PI散点图如何？

huikaimin

在检测细胞凋亡的时候，我一般会在FSC，SSC设置一个门，来去除细胞碎片。而且，根据，FL1，ssc,  以及FL2，SSC来设置 接受细胞的门，确保分析的是主要细胞群体。倪老师，您一般是如何设置门的？

陈瑞斌

niwanmao 发表于 2014-12-2 10:35
参考这个设门：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2186-1-1.html

非常感谢老师回答我的问题。前两天有事没及时回复您不好意思。我按照你介绍的反向圈门法，重新画了一下门。发现右下角的凋亡荧光群，全部都是碎片。 估计是凋亡和坏死细胞比较脆弱。一消化就破碎成碎片了；我的细胞又特别难消化。 那老师对这种特别难消化细胞做流式有什么好的建议么？  非常感谢

niwanmao

陈瑞斌 发表于 2014-12-3 00:03
非常感谢老师回答我的问题。前两天有事没及时回复您不好意思。我按照你介绍的反向圈门法，重新画了一下门 ...

难消化的贴壁细胞，不建议做AV-PI，因为消化过程对细胞膜影响很大。
建议改做线粒体膜电位、caspase-3等凋亡指标。

dcl60066

niwanmao 发表于 2014-11-26 10:49
参考这个设门：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2186-1-1.html

请问为什么不直接在FSC以及SSC的图中gate正常细胞形态的那群细胞直接分选凋亡呢，这样不就自动去掉了碎片吗？谢谢

niwanmao

dcl60066 发表于 2015-1-19 10:00
请问为什么不直接在FSC以及SSC的图中gate正常细胞形态的那群细胞直接分选凋亡呢，这样不就自动去掉了碎片 ...

原理类似，这个方法新手比较容易掌握。